多肽制备

固相多肽合成就是不断地在固相载体上加入α-氨基和侧链基团被保护的氨基酸。

FMOC基团是用来保护α-氨基中的N的，去除保护基团后，再加入第二个氨基酸。产生的多肽通过一个连接臂将C端连接在树脂上，它可以被裂解下来。

通常情况下，在多肽从树脂上裂解下来的同时去除侧链保护基团，一般采用哌啶去FMOC保护基团，肽树脂的裂解和侧链保护基团去除一般用强酸，比如三氟乙酸，N,N-二甲基甲酰胺（DMF）是树脂去保护、氨基酸反应和洗涤的首选溶剂。

1. 合成步骤：

步骤	溶液或溶剂	循环数	时间
1	DMF	2次	30s
2	含20%哌啶DMF溶液	1次	5min
3	DMF	1次	30s
4	含20%哌啶DMF溶液	1次	10min
5	DMF	6次	30s
6	Fmoc-AAFHBTUHPBtNMM15	1次	30-60min
7	DMF	2次	30s

HBTU: 2-(1H-Benzeotriazole-1-yl)-1,1,3,3,-tetramethyluroniumhexafluorophosphate
HOBt: N-Hydroxybnzotrizole•H2O
NMM: N-methylmorpholine

2． 从树脂上分离下来：

步骤溶液或溶剂循环数时间1DMF2次30s2含20%哌啶DMF溶液2次10min3DMF6次30s4DCM6次30s5DCM6次30s6干燥1次10min7试剂K1次2.5h

试剂K：TFA/苯甲硫醚/EDT/苯酚/水=87.5/5/2.5/2.5/2.5（v/v）

3. 纯化：

RP-HPLC纯化

① HPLC条件：

流动相：A）0.1%TFA水溶液

B）0.1%TFA乙腈溶液

梯度：A/ B（90/ 40）到A/ B（40/ 90）30min

流速：1ml/min

温度：室温（23℃）

检测：214nm的紫外

样品：冻干的粗品

② 步骤：

a. 将粗品溶解在流动相中

b. 注入20-30mg（2-2.5ml）样品

c. 将主峰收集到50ml管中

d. 冻干

4. 鉴定：

LC/MS条件：

流动相：A）0.05%TFA水溶液

B）0.1%TFA乙腈溶液

梯度：A/ B（90/ 10）到A/ B（40/ 60）15min

流速：1ml/min

温度：室温（23℃）

检测：214nm的紫外

MS API:ESI