细胞介导的细胞毒作用（CMC）检测法：靶细胞的制备

靶细胞的制备（分离肿瘤细胞和TIL）

1．无菌摘取肿瘤，置预冷的含抗生素的RPMI-1640培养液中，剪去结缔组织，剪碎瘤体至1～2mm大小。放置2～10分钟让组织块沉淀，吸去上清液。

2．将沉淀的组织块置5～10倍体积的消化液中，37℃中搅拌或振荡1～4小时或室温过夜。用力吹打组织块，即可得到单个细胞悬液。

3．离心400×g 10分钟，除去消化液。用5倍体积的RPMI-1640培养液悬浮细胞。将细胞悬液小心加到双层淋巴细胞分离液上。

4．离心400×g 30分钟，上层分界面是新鲜肿瘤细胞，下层分界面是肿瘤组织中的淋巴细胞（TIL），可用于诱导杀伤活性和扩增。

5．用RPMI-1640培养液洗涤肿瘤细胞两次，用作检测LAK细胞活性的靶细胞。此细胞可以在含50％人AB 血清 和10％二甲基亚砜（DMSO）的RPMI-1640培养液中以1×107～5×107/ml的浓度置液氮中冻存，用前复苏。