丁香实验_LOGO
登录
提问
我要登录
|免费注册
点赞
收藏
wx-share
分享

ELISPOT实验方法步骤详解

互联网

1849

 

ELISPOT

1.      PBS溶解抗原为30 μg/ml,加100 μl/孔于PVDF膜铺底的96孔灭菌板过夜;

2.      第二天吸去包被液后,加5%FCS的PRMI 1640培养基100 μl封闭1小时,37 o C;

3.      准备脾细胞悬液(用氯化铵去除红细胞,制备成单个脾淋巴细胞悬液);

4.      从1 × 106 /孔开始,按1:3的稀释度开始逐孔稀释做不同浓度梯度,并做3个复孔,37 o C静置培养5小时;

5.      PBS洗3~5次,生物素化的抗鼠IgG二抗孵育30 min;

6.      PBS洗3~5次,链亲和素标记的碱性磷酸酶孵育30 min;

7.      PBS洗3~5次,用底物BCIP/NBT显色,显微镜下观察显色反应,显色后及时终止反应;

8.      计数每孔中的斑点数目,计算每106 个脾细胞中抗体分泌细胞数量。

 

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序