光镜免疫金组织化学染色方法

一、原理

本法是由Geoghegan等（1978）首次应用金标探针检测B淋巴细胞表面抗原，将胶体金颗粒（大于20nm）标记在第二抗体或SPA分子上，制备成金标二抗。

其原理是当特异性抗体与抗原结合后，用金标二抗或金标SPA与特异性抗体结合，形成抗原-抗体-金标抗体复合物，此时在光镜（10X100倍）下可见红色颗粒物，即为抗原-抗体结合物。该方法称为免疫金染色（immunogold staining,IGS）。

其特点简便、快速（因不需银显影），要求金标抗体浓度高，而且金颗粒直径大于20nm.

二、IGS间接法染色步骤

（1）4/lm石蜡切片常规脱蜡至水，0.05mol/L（pH7.4）TBS洗2×3min.

（2）1%卵蛋白[EA,用0.05mol/L（pH7.4）TBS稀释]温育15min,不洗。

（3）加入适当稀释特异性抗体，37℃温育1h，0.05mol/L（pH7.4）TBS洗2X3min。

（4）0.02mol/L（pH7.4）TBS（内含0.1%BSA）洗10min。

（5）1%卵蛋白温育15min，不洗。

（6）适当稀释的金标记SPA30nm（PAG30nm）室温孵育1~2h,0.05mol/l（pH7.4）TBS洗3X3min。

（7）双重蒸馏水洗5min，1%戊二醛洗10min，双重蒸馏水洗5min.

（8）用0.01%伊文斯蓝衬染3min，50%缓冲甘油封片。

（9）结果观察：阳性呈现红色细颗粒状。