如何得到稳定转染的克隆

问：

各位园友，本人今天刚刚做了转染，用的24孔板，质粒是带有荧光的（含neo基因的载体），如果转进去了，下一步就要进行筛选？但是不知道具体该怎么做才能得到稳定转染的细胞？

答：

最好先做以下预实验，摸一下G418的浓度范围，以未转染的细胞做对照，当未转染细胞完全杀死作为最佳筛选浓度。在选择压力下待存活的细胞逐渐形成小克隆后可以传代，随后可以逐步降低G418浓度至原使用浓度的一半作为维持压力。这样多代选择出来的细胞就是阳性克隆，也就是稳定细胞系了。