用PCR检测白血病时T细胞受体β链基因重排

1. 引物设计：

已知基因重排分二步进行，其结果为：

①D/J重排：Dβ1和Jβ6 Jβ7之间重排,产生D―N―J融合片段,N为随机寡核苷酸；

②V/D重排：Vβ和Dβ1―N―Jβ6―Jβ7之间再重排，产生V―N’―D―N―J重排片段。

对于D/J重排引物设计于Dβ1和Jβ2互补片段，对于V/D重排则设计一条与Vβ片段互补，另一条与Jβ2片段互补的引物。

2. PCR扩增：

①在100μl PCR反应液中含1μg DNA引物对各30pmol，4×dNTP 200μmol/L，Tris-HCl 10mmol/L（pH8.0），KCl 50mmol/L，MgCl2 3.0mmol/L，明胶0.001％；

②预变性：93℃，7min，55℃，2min，加Taq DNA酶1U；

③PCR扩增：93℃×1min，55℃×1min，72℃×1min 共30个循环最后一个循环时在73℃延伸10min。

3. 产物分析

经扩增后的寡核苷酸约55～96bp，两套引物扩增结果相同，这是因为V引物在V片段3’端,而D引物在片段5’端，两者相距不远。可以用PCR直接测序，也可用PAGE分析单克隆性重排。