蛋白酶解肽段的纯化
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问:蛋白酶解肽段的纯化,去除杂质,去除,即可,不需要分离!请问怎么设计色谱条件呢?柱子,填料,流动相,流速??谢谢!! 问题比较菜!
答:要看你的蛋白和酶解以后片断的大小了,楼主是要保留蛋白片断去除酶解buffer 里的东西么?一般根据样品中蛋白的大小和疏水性选择不同的柱子。常用的是反相疏水柱,几千的蛋白可以用C18硅胶键合柱,上万的要用C3的了。流动相主要是乙氰和水,流速要根据你的柱子大小而定,一般4.5mm直径的柱子1ml/min。体积在大的柱子可以相应提高流速。
园子里的讨论很多,最主要的是根据你的样品摸条件,别人的色谱条件可能不适合你,祝你好运!
答:load:A,10min;wash:50%B,20min,收集;wash 。