抗体的纯化

1. 建议从商业提供的蛋白 A- 或 G-琼脂糖开始。如从蛋白 A 或 G 偶联到介质开始，则偶联到溴化氰活化的琼脂糖的方法前面；

2. 蛋白 A- 或 G-琼脂在起始缓冲液（100 mmol/L，pH 7.5 Tris-HCl，100 mmol/L NaCl） 内室温放置 30 min。每 g 介质约用 10 ml 缓冲液。水合作用期间干介质体积将溶胀 3～4 倍，此后步骤如不注明均在室温下进行；

3. 溶胀后的介质在起始缓冲液内装柱。再用 5～10 倍体枳同样缓冲液洗柱，建议最大流速为 1 ml/min；

4. 3～5 倍体积 0.1 mol/L，pH 2.5 glycine-HCl 洗柱。洗去可能存在的污染物；

5. 再用 5～10 倍体积起始缓冲液平衡柱。若欲存放则应用含 0.02％ NaN₃ 的起始缓冲液平衡，然后 4℃ 保存；制备抗体溶液

6. 抗体样品液离心 10 000×g，10 min，除去沉淀；

7. 用等体积起始缓冲液稀释样品，或加入 1/10 体积 10× 起始缓冲液，以获得适当的 pH 和离子强度；

8. 上样，即将缓冲好的样品液加到亲和柱内。每 ml 溶胀介质可以上样 2 ml 多克隆抗体血清或 20 ml 单克隆抗体上清。通常上样的总 IgG 量应略低于柱总结合容量的 80％，每 ml 溶胀介质能结合 5～20 mg IgG；

9. 在洗脱前，用 10 倍体积起姶缓冲液洗柱。让 A₂₈₀ 值恢复到基线或本底水平；

10. 用 5～10 倍体积 0.1 mol/L glycine-HCl（pH 2.5） 缓冲液洗脱结合的抗体。洗脱液以 1 ml 为洗脱组分分部收集，收集试管含 0.1 ml 1 mol/L Tris-HCl （pH 8.0）缓冲液以便及时中和低 pH；

11. 汇集 A₂₈₀ 大于等于 0.2 的峰组分；

12. 若需除去盐分或改变缓冲液，可以在磷酸缓冲盐液（137 mmol/L NaCl，2.7 mmol/L KC1，6.5 mmol/L Na₂HPO₄）中透析，或过凝胶离心柱，或用超滤的方法；

13. 以 1 ml 为单位分装，近期用的存放 4℃， 长期储存放 -20℃；

14. 亲和柱用 5 倍体积 0.1 mol/L glycine-HCl（pH2.5）洗脱液再次洗后，用 10 倍体积起始缓冲液平衡，即可再次使用。如欲存放，用含 0.02％ NaN₃ 的起始缓冲液平衡后 4℃ 保存。