外周血中嗜碱性粒细胞分离方法

Percoll密度梯度离心分离法：

1、Pcrcoll混悬液的配制：Percoll 90ml,HBSS 9ml, HEPES(0.25mol/l)1ml(PH 7.3),HCL(1mol/l)0.4ml 调节至PH7.4

2、制备Percoll密度梯度管

密度 Percoll/HBSS(ml/ml)

1.070 24:20

1.079 27:15.9

1.088 23:10

3、加分层液的顺序：底层先加4ml 1.088g/mlPercoll液，第二层加4Ml1.079g/mlPercoll液，嘴上曾加3ml 1.070g/ml的Percoll液，制成3个密度梯度管，用于分离碱性粒细胞。

4、将新鲜的抗凝血（用0.1mol/lEDTA PH 7.7抗凝）按等体积加于Percoll密度梯度分层液上，室温下1200r/min离心25分钟。

5、将每一细胞层分别吸出各放于1支试管内，加无Ca,Mg离子的Hanks液在4度下洗涤3次，每次1200r/min,离心10分钟弃去上清。

6、将分别得到的各层细胞涂片，固定后用Wright-Giemsa染液染色，在显微镜下检查嗜碱性粒细胞（大多数在中间层，但不同个体嗜碱性粒细胞的密度不同，因此可能会出现在其他细胞层），嗜碱性粒细胞染成紫红色。