细胞培养 + ELISA的结合产物：ELISPOT技术

ELISPOT（Enzyme-Linked Immunosorbent SPOT, 酶联免疫斑点法）：是一种体外检测特异性抗体分泌细胞和细胞因子分泌细胞的固相酶联免疫斑点技术，是ELISA技术和细胞培养技术结合而发展的新型技术。使体外检测各种细胞产生细胞因子及细胞分泌抗体研究有了新的突破

ELISPOT技术优点：

1. 特异性和敏感性高：能从 20万-30万 细胞中检出 1个 分泌该蛋白的细胞。

2. 显色反应：显现清晰可辨的斑点可直接在显微镜下人工计数斑点或通过ELISPOT分析系统对斑点进行计数，1个斑点代表1个细胞，从而计算出分泌该蛋白的细胞的频率。

3. 某些研究不仅要测细胞因子生成量，还需检测分泌此细胞因子的细胞频率。

4. 基本方法与ELISA相似。

ELISPOT技术应用：

1. 疫苗研究

2. 自身免疫病研究

3. 肿瘤研究

4. 移植中排斥反应的预测

5. 感染和免疫反应研究

6. 抗原决定簇图谱分析

7. 化合物和药物免疫学反应的筛选

ELISPOT技术基本原理：

1. Coated Captured Ab in the plates

2. Added stimulated or unstimulated cells in the plates

3. Cytokines or Ab bound to plates

4. Detected Ab with enzyme

5. Counted spots with automated ELISpot reader systems or manually, using a stereomicroscope

References

zerkinsky et al., A solid-phase enzyme-linked immunospot (ELISPOT) assay for enumeration of specific antibody-secreting cells. J Immunol Methods 1983; 65: 109.

Asai et al., Evaluation of the modified ELISPOT assay for gamma interferon production in cancer patients receiving antitumor vaccines. Clin Diagn Lab Immunol 2000: 7: 145.

Vasan et al., Phase 1 Safety and Immunogenicity Evaluation of ADMVA, a Multigenic, Modified Vaccinia Ankara-HIV-1 B'/C Candidate Vaccine. PLoS One. 2010; 5: e8816.