噬斑的扩增

[材料和试剂]

（1）恒温摇床

（2）培养管

（3）LB培养基

（4）甘油

[操作步骤]

（1）以LB培养基稀释ER2537过夜培养物。1ml分装至培养管，每管中接种一个克隆。第三轮筛选后，每10个克隆就可能获得一个共同序列。

（2）使用消毒牙签或枪头，穿刺噬斑，接种至上述培养管中。注意：要挑选噬斑数不超过100的平板上的噬斑，从而保证每一个噬斑仅包含单个DNA序列。

（3）37℃振摇孵育4.5~5h（不能过长）。

（4）可做可不做。除了测定单个克隆的序列，也可将筛选到的全部噬菌体进行测序，一步就可能获得12个残基中的共有序列。取10ml未扩增的洗脱物加至1ml宿主菌稀释液中37℃振摇孵育4.5~5h。

（5）将培养物转至微量离心管，离心30s，取上清转入新的离心管中再次离心，取上部约80%的上清转至新的离心管。这是扩增的噬菌体贮存液，能4℃保存数周，若需长期保存，以无菌甘油1：1稀释后，-20℃保存。