内切酶在PCR反应产物中的活性(Activity of Restriction Enzymes in a Primer Extensio

通常PCR反应以后还要对产物进行酶切才能进入下一步工作。为了方便起见，我们可以将内切酶直接加入到PCR反应产物中去，而省略了纯化产物的步骤。下表归纳了在PCR产物混合物中各种限制性内切酶的酶切活性。

酶切反应条件如下：在20 µl PCR产物混合体系中加入5U的内切酶，按相应的反应温度温育1小时。通常20 µl PCR产物体系中含有1 µg底物DNA，1单位的Vent DNA聚合酶，1× ThermoPol Buffer [10 mM KCl， 20 mM Tris-HCl （PH 8.8@25℃），10 mM (NH4 )2 SO4 , 2 mM MgSO4和0.1% Triton X-100]，以及终浓度为200 µM的dNTPs。表中标记有的内切酶在酶切反应前需加入NaCl（终浓度为100 mM）或相应的10× NEBuffer（1×终浓度）。

注意：在非最佳条件下进行酶切反应容易出现星号活性。要避免星号活性或希望取得更好的酶切效果，则需用乙醇沉淀纯化DNA，再将其溶解于相应的酶切缓冲液。此外，如果使用不纯的DNA聚合酶，会因其中混有其它核酸酶而影响整个反应结果。

+++表示完全切割；++表示约50%被完全切割；+表示约25%被完全切割。

| A | B | C | D | E | F | H | K | M | N | P | R | S | T | X | 

酶     在反应物中的活性
　　Acc I      +  
　　Acc65 I   + +  
　　Aci I        + + +  
　　Acl I     + +  
　　Afl II     + + +  
　　Afl III   + +  
　　Age I   + + +  
　　Ahd I   + +  
　　Alu I   + + +  
　　Alw I   + +  
　　AlwN I   + +  
　　Apa I   + ++  
　　ApaL I   + + +  
　　Apo I   + +  
　　Asc I   + + +  
　　Ase I   +  
　　Ava I   + + +  
　　Ava II   + +  
　　Avr II   + + +  
 　　none 
　　BamH I   + + + 
　　Ban I   + + +  
　　Ban II   + + +  
　　Bbs I   + + +  
　　Bbv I   + +  
　　Bcg I   + +  
　　BciV I  + +  
　　Bcl I   + + +  
　　Bfa I   none 
　　Bgl I   +  
　　Bgl II   + + +  
　　Blp I   + + +  
　　Bmr I  + + + 
　　Bpm I   + +  
　　Bsa I   +  
　　BsaA I   + + +  
　　BsaB I   + +  
　　BsaH I   + + +  
　　BsaJ I   + + +  
　　BsaW I   + +  
　　BseR I   + + +  
　　Bsg I   + +  
　　BsiE I   + +  
　　BsiHKA I *   + +  
　　BsiW I   + +  
　　Bsl I  + +  
　　Bsm I   + + +  
　　BsmB I   + +  
　　BsmF I   + +  
　　BsoB I   + + +  
　　Bsp1286 I   + + +  
　　BspD I   + +  
　　BspE I *   + + +  
　　BspH I   + +  
　　BspM I   none 
　　Bsr I   + + +  
　　BsrB I   + + +  
　　BsrD I   + +  
　　BsrF I   + +  
　　BsrG I   + +  
　　BssH II   + +  
　　BssK I   + +  
　　BssS I   + + +  
　　BstB I   + + +  
　　BstE I   + + +  
　　BstN I   + +  
　　BstU I   + +  
　　BstX I   + + +  
　　BstY I   + +  
　　BstZ17 I   + +  
　　Bsu36 I   + + +  
　　Btg I  + + + 
　　Bts I  + + +  
　　Cla I   + +  
　　Dpn I   (none, requires methylated substrate)  
　　Dpn II   + + +  
　　Dra I   + +  
　　Dra III *   + + +  
　　Drd I   + +  
　　Eag I   +  
　　Ear I   + + +  
　　EcoN I   + +  
　　EcoO109 I   + + +  
　　EcoR I   + +  
　　EcoR V   + + +  
　　Fok I   none 
　　Fse I   + + +  
　　Fsp I   + +  
　　Hae III   + + +  
　　Hga I   + + +  
　　Hha I   + +  
　　Hinc II   + +  
　　Hind III   + + +  
　　Hinf I   + +  
　　HinP1 I   + + +  
　　Hpa I   + + +  
　　Hpa II   + + +  
　　Hph I   + + +  
　　Kpn I   + + +  
　　Mbo II   + + +  
　　Mfe I   + +  
　　Mlu I   + +  
　　Mly I  + + + 
　　Mnl I   + + +  
　　Msc I   + +  
　　Mse I   + +  
　　Msl I   + + +