一种快速高效分离和纯化重组腺病毒伴随病毒载体的方法

一种快速高效分离和纯化重组腺病毒伴随病毒载体的方法

吴小兵 董小岩 伍志坚 屈建国 侯云德
(中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室; 形态室, 北京100052.
~undefined Email: wuxb@public.east.cn.net )

摘要 利用2 型腺病毒伴随病毒(adeno-associated virus type 2, AAV-2)能够抵抗氯仿的特性, 采用“氯仿处理-PEG/NaCl 沉淀-氯仿抽提” 3 个步骤分离浓缩和纯化重组腺病毒伴随病毒(recombinant adeno-associated virus, rAAV), 整个纯化过程可在4 h 内完成. 最终从5 个转瓶生长的4×10 ⁹ 个载体生产细胞中可得到5 1013 病毒颗粒/mL, SDS-聚丙烯酰胺凝胶结果表明, rAAV 的纯度大于95%, 电子显微镜 下绝大多数病毒颗粒的结构完整. 纯化后的rAAV 仍保持较强的感染性, 其感染性滴度达到2×10 ¹² 转导单位(transducing unit, TU)/mL, 总的病毒颗粒数与感染性病毒颗粒数的比值为25. 为rAAV 大规模生产后的纯化提供了一种简便快速低成本的方法.

关键词 重组腺病毒伴随病毒 氯仿 纯化

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