CTAB法抽提核酸

①取0. 2g 各中药材样品分别用液氮( Ⅰ) 、玻璃砂( Ⅱ) 、氧化铝( Ⅲ) 研磨。

②加入56 ℃ 10 倍预热的缓冲液C 于56 ℃温育30 min , 离心, 取上清液加入等体积氯仿- 异戊醇(24∶1) 抽提(室温, 不能低于15 ℃, 否则CTAB 会沉淀) , 10 000g 离心15 min。

③取上清液加入1/ 10 倍体积缓冲液D , 于室温下放置15 min , 再用等体积氯仿- 异戊醇(24∶1) 抽提1 次。

④上清液加入缓冲液C 于室温下放置6h (或过夜) 。

⑤12 000g 离心25 min , 吸去上清液, 用70 %乙醇洗沉淀两次, 加入150μL 缓冲液E , 存于4 ℃备用。

缓冲液C (50 mmol・L - 1 Tris - HCl , pH8. 0 , 10 mmol・L - 1 EDTA , 0. 7mol・L - 1NaCl ,1 %β- 巯基乙醇, 1 %CTA) 。

缓冲液D (10 % CTAB , 0. 7mol・L - 1Na2Cl) 。

缓冲液E (10 mmol・L - 1 Tris , 1 mmol・L - 1EDTA. pH 8. 0 ) 。