原理
CTAB法：该方法简便、快速，DNA产量高(纯度稍次，适用于一般分子生物学操作)。 CTAB是一种非离子去污剂，植物材料在CTAB的处理下，结合65 °C水浴使细胞裂解、蛋白质变性、DNA被释放出来。CTAB与核酸形成复合物，此复合物在高盐（>0.7 mM）浓度下可溶，并稳定存在，但在低盐浓度（0.1-0.5 mM NaCl）下CTAB-核酸复合物就因溶解度降低而沉淀，而大部分的蛋白质及多糖等仍溶解于溶液中。经离心弃上清后，CTAB-核酸复合物再用70－75%酒精浸泡可洗脱掉CTAB。再经过氯仿/异戊醇(24:1) 抽提去除蛋白质、多糖、色素等来纯化DNA，最后经异丙醇或乙醇等DNA沉淀剂将DNA沉淀分离出来。
材料与仪器
水稻叶片
液氮 CTAB 氯仿 异戊醇 乙醇 NH4AC EtOH
离心管 离心机
液氮 CTAB 氯仿 异戊醇 乙醇 NH4AC EtOH
离心管 离心机
步骤
1. 采集适量幼嫩叶片，用液N2研成粉末，0.4 g装入1.5 ml离心管中（-20 ℃预冷）。
2. 预热1.5×CTAB到95 ℃，加1 ml到装有叶片粉末的离心管中，混匀（防止冻融）。
3. 立即置于65 ℃水浴30min，每5分钟，上下颠倒1次。
4. 12000 g离心5分钟。
5. 吸取上清液约600 μl，加入等体积（600 μl）氯仿/异戊醇(24:1)，上下颠倒数次，至下层液相呈深绿色为止。
6. 12000 g离心5分钟。
7. 取450 μl上清于一新1.5 ml离心管，加入1 ml 95%乙醇和45 μl 10 M NH4AC），混匀，室温放置10min。
8. 12000 g离心10min，去上清，用75% EtOH浸洗沉淀，自然干燥约30 min。
9. 加入50 μl 1/10 TE或无菌水（含20 mM/RNase），置于4 ℃过夜，待DNA溶解后，检测DNA浓度及质量。
2. 预热1.5×CTAB到95 ℃，加1 ml到装有叶片粉末的离心管中，混匀（防止冻融）。
3. 立即置于65 ℃水浴30min，每5分钟，上下颠倒1次。
4. 12000 g离心5分钟。
5. 吸取上清液约600 μl，加入等体积（600 μl）氯仿/异戊醇(24:1)，上下颠倒数次，至下层液相呈深绿色为止。
6. 12000 g离心5分钟。
7. 取450 μl上清于一新1.5 ml离心管，加入1 ml 95%乙醇和45 μl 10 M NH4AC），混匀，室温放置10min。
8. 12000 g离心10min，去上清，用75% EtOH浸洗沉淀，自然干燥约30 min。
9. 加入50 μl 1/10 TE或无菌水（含20 mM/RNase），置于4 ℃过夜，待DNA溶解后，检测DNA浓度及质量。
注意事项
1. 尽量取材幼嫩叶片，如太老，酚类物质多，必须用10 mM的β-ME处理。
2. 研钵预冻，粉末至加CTAB前不要融化。
3. 24:1的氯仿/异戊醇抽提时动作应轻柔，转移用的枪头最好是剪宽了的。
4. 所用试剂必需灭菌，手套。
2. 研钵预冻，粉末至加CTAB前不要融化。
3. 24:1的氯仿/异戊醇抽提时动作应轻柔，转移用的枪头最好是剪宽了的。
4. 所用试剂必需灭菌，手套。
来源：丁香实验
