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有限稀释法

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21444

有限稀释法的程序

①制备饲养细胞悬液

②转染了重组质粒后的细胞计数,并调细胞数在1~5×103/ml

③取130个细胞放入6.5ml含饲养细胞完全培养液,即20个细胞/ml,100μl/孔加A、B、C三排为每孔2个细胞。余下2.9ml细胞悬液补加2.9ml含饲养细胞的完全培养液,细胞数为10个/ml,100μl/孔加D、E、F三排,为每孔1个细胞。余下2.2ml细胞悬液补加2.2ml含饲养细胞的完全培养液,细胞数5个/ml,100μl/孔,加G、H两排,为每孔0.5个细胞。

④培养4~5天后,在倒置显微镜上可见到小的细胞克隆,补加完全培养液200μl/孔。

⑤第8~9天时,肉眼可见细胞克隆。

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