CaCl2感受态细胞的制备

试剂准备：

LB培养基，50mL离心管4个，250mL摇瓶1个，1.5mL 离心管高压灭菌

0.1M CaCl2高压灭菌

含15%甘油的0.1M CaCl2：50%甘油、0.15M CaCl2高压灭菌，1:2混合配制

制备步骤：

1．前夜接种受体菌（DH5α或DH10B），挑取单菌落（或直接用－80℃保存的单克隆菌液100μL）， 放入10mL LB培养基中37℃摇床培养过夜（约12~16小时）；

2．取1ml过夜培养物转接于100ml LB培养基中，在37℃摇床上剧烈振荡培养约2.5-3小时（250-300rpm），检测OD550在0.6时最佳 (当OD550 在0.2时每20分钟检测一次)；

3．将0.1M CaCl2溶液置于冰上预冷；

以下步骤需在超净工作台和冰上操作

4．将100mL菌液分装于4个50mL离心管，冰上冷却10min；

5．4℃下3000g冷冻离心5min；

6．弃去上清，加入10mL预冷0.1M CaCl2溶液，用移液枪轻轻上下吸动打匀，使细胞重新悬浮，在冰放置30min~60min；

7．4℃下3000g冷冻离心5min；

8．弃去上清，加入含15%甘油的预冷0.1M CaCl2溶液5mL，用移液枪轻轻上下吸动打匀，使细胞重新悬浮，100μL/管冰上分装至1.5mL 离心管中，封口并标记，－80℃贮存备用；

9．若直接用于转化实验，可不加甘油。 (责任编辑：大汉昆仑王)