免疫球蛋白提取技术：禽IgA提取与纯化

（一）材料与 试剂 配制

1．禽胆汁
2．饱和硫酸铵溶液
3．0.01Mol/L pH7.4PBS液
4．0.10Mol/L pH6.4PBS液（0.30Mol/L NaCl）
5． DEAE ₅₂ -纤维素

（二）操作方法

1．取冷藏的胆汁3Ⅹml，缓慢滴加Ⅹml饱和硫酸铵液，边加边搅拌，使成25％饱和硫酸铵液。4℃放置30min。
1． 3 000r/min离心30min，去沉淀。
2． 取上清，加饱和硫酸铵液，使成35％的饱和度，4℃放置30min。
3． 3 000r/min离心30min，弃上清。
4． 取沉淀，加0.85％NaCl液溶解，加饱和硫酸铵溶液，重复步骤3和4三次。
5． 将沉淀用0.85％NaCl液溶解，装入透析袋，以0.01Mol/L pH7.4PBS液透析。
6． 以0.01Mol/L pH7.4PBS液平衡，过DEAE52纤维柱（20×250mm）。
7． 取透析样品4ml(﹥20mg/ml蛋白浓度)加入层析柱。以0.01Mol/L pH7.4PBS液洗脱。
8． 再用0.10Mol/L pH6.4PBS液（NaCl浓度为0.30Mol/L）洗脱，收集洗脱液。
10．浓缩洗脱蛋白液至20mg/ml，分装， 低温冰箱 保存。