正常大兔主动脉内皮细胞的培养

实验材料：

1.  正常大兔主动脉；

2.  不含Ca²⁺ 和Mg²⁺ 的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素，pH7.2；

3.  培养用液：M199培养液（含20%小牛血清）；0.125%胰蛋白酶-0.01%EDTA（1:1，V：V）混合消化液；D-Hanks液、100IU/ml青霉素和100μg/ml链霉素；

4.  培养器具：培养瓶或皿、白内障、眼科剪、镊子等；

培养方法：

1．  将动物主动脉取出后，用丝线结扎血管一端，然后用探针顶住该端，将整条血管翻转，使内膜翻在外面。将另一端翻折入腔内0.5cm并用丝线扎紧，以防外膜外露及避免酶液进入外膜腔内；

2．  用D-Hanks液清洗干净外翻的内膜面，将血管浸泡在含0.1%胶原酶溶液的小瓶内。盖上瓶盖，在37℃水浴中轻轻摇荡消化，使内皮细胞离散下来。消化15—20min后，见酶液稍有浑浊，即加入等量的含20%小牛血清的M199培养液，以终止酶的作用。离心（1500r/min,5min）后，弃上清液，用20%小牛血清M199培养液重新悬浮细胞；

3．  接种到培养器皿内，入37℃、含5%CO₂ 培养箱中培养。待细胞长满瓶皿的生长表面即可传代；