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石蜡DNA提取

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1. 取蜡块切片15-20张(8UM),置于EP管中,加入1ML的二甲苯,37度作用3小时,10000×3分钟,倾去二甲苯。重复3-4次,观察管壁是否光滑。若有蜡质残存,需继续脱蜡。
2. 剃度酒精水化:100% 1ML,室温30分钟,10000×3分钟,去上清;95%;75%;50%。
3. 消化:1×SSC 500UL ,洗涤沉淀,12000×3M离心。干燥沉淀后加石蜡消化液 400UL,20mg/ml的PK 20ul;55度消化120小时,至第四天,补加PK 10ul。
4. 消化后见液体清亮,肉眼见组织较少。将其转入98度的水浴箱煮沸10分钟,以灭活PK,置冰上迅速冷却,离心10000×5分钟。
5. 取上清加等量的酚-氯仿,轻颠倒混匀成乳白色,低温离心,14000×10分钟。小心取上清,再加等量的酚-氯仿,混匀,离心。
6. 取上清加冰无水乙醇两倍体积及1/10的乙酸钠(PH 5。2),颠倒混匀。置-20度半小时,14000×10分钟低温离心,去上清。
7. 沉淀用70%的乙醇洗涤2次,(加1ML,颠倒EP管数次,14000×5分钟,离心),自然干燥沉淀。
8. 加TE20ul,(含RNA酶),4度过夜。

20×SSC 配方:3mol/l Nacl ,0。3 M 柠檬酸三钠·2H2O ,用HCL调PH值至7。0
石蜡消化液:150nmol/l NacL:15mmol/l柠檬酸钠,1%SDS,PH 7。0。

 

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