CHO细胞(中国仓鼠卵巢细胞)的传代
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1、培养液用的GIBCO的RPMI-1640。里面加10%小牛血清,青霉素+链霉素。消化时用0.25%胰酶。
2、我都是1640配营养液时现加血清和双抗,血清分装后直接由-20度到37度水浴箱中溶掉,没发现血清有沉淀现象。总体积100ml的培养液:90ml1640+10ml牛血清+1ml双抗,无其他物质了。培养过程中没发现有什么问题。
3、传代时,先吸掉培养液,我都不用倒掉的方法,怕由于瓶口而污染,都是慢慢吸管吸出的。然后培养液略微冲洗一下,加胰酶,倒置显微镜下见80%细胞变圆后,吸出胰酶,培养液终止消化。吹打下细胞,按所需稀释比例传代。我现在的CHO细胞状态不是很好,但是疯长,不知道为什么。所以每次传代时,我都是留一滴足够,差不多能稀释20倍了。