CHO细胞的传代、培养方法
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细胞复苏后,在显微镜下观察大约有80%~100%的细胞已经贴壁时用新鲜的培养基换掉原来的培养基,去除DMSO对细胞的毒害,估计复苏到换液的时间为0.5~1.5h。
2~3d细胞长满后传代,传代前先把培养基和0。2%的胰酶从冷库放到室温1~2H,由于冷库中的培养基温度与在温房的温差很大,这样做可以防止细胞"感冒"。
然后把培养瓶中的废液倒掉,加入约5~10ml胰酶,把培养瓶平放使胰酶能够浸润到瓶子的表面,放到瓶架上,把瓶架转速调到平常运转的倍,大约1MIN后再把胰酶倒掉,一部分很少即可,拍打瓶子,看见细胞象针眼一样融融的下滑加入培养基就可以了,如果有部分还难以消化下来,使劲摇晃瓶子也能使其掉下。
加入培养基后摇晃瓶子使细胞全部悬浮到培养基中,然后把培养基等份分到其他的培养瓶中,细胞密度大小决定所传瓶数,一般一传四即可。把瓶架调到合适的转速,放到温房继续培养,3天后再行传代,如此反复进行。