互联网2013-08-19
1从微量培养基平皿中挑取单个菌落,接种于5ml 2×YT培养基(17g蛋白胨,10g Bactoyeast,5g NaCl,加水至1 000ml)中,37℃振荡培养过夜。 2取上述过夜菌1∶100稀释接种入500ml新鲜的2×YT培养液中,37℃振荡培养至OD=05~07,约25~3h。 3将上述带有菌液的三角瓶置冰浴15~30min。4 000r/min 4℃离心20min。 4去上清,用500ml预冷的无菌的1mmol/L Hepes(pH值70)溶液重悬细胞沉淀。4 000r/min 4℃离心20min。 5 4℃离心20min,用10ml含有10%甘油的1mol/L Hepes(pH70)溶液重悬细胞。 6 4 000r/min 4℃离心,最后用1ml 10%甘油重悬细胞沉淀,总量约2ml左右。 7分装小管,每管100μl,置于冰浴待用,或立即冻于干冰中,存放于-70℃。
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