MTT 检测步骤
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1、接种细胞:收集对数生长期细胞,调整细胞悬液浓度,以每孔1000-10000个细胞接种到96孔板,每孔体积200?l.
2、培养细胞:同一般培养条件,培养3-5天(可根据试验目的和要求决定培养时间)。
3、呈色:培养试验设定时间后,每孔加含20?l MTT 溶液(5mg/ml)的培养液200?l,继续培养1-4小时,终止培养,小心吸弃孔内培养上清液,对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加150 l DMSO ,振荡10分钟,使结晶物充分融解。
4、比色:选择490nm波长,在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值,记录结果,以时间为横坐标,吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。需计算抑制率时,抑制率=(对照-给药)/对照×100%。