确定特定基因的方法--定位克隆
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由于许多遗传病的基因 位点已经有了精确的染色体定位和相应的DNA标记,所以可以用定位克隆的策略分离这些基因。杜兴肌营养不良、慢性肉芽肿、亨廷顿氏舞蹈症等几十个基因的克隆分离就依靠此种方法。
①通过染色体缺失或平衡易位以及连锁分析,确定该基因在染色体上的位置,并将这个位置精确到2 000 kb左右的范围内。
②利用距该基因最近的DNA标记,筛选YAC库,采用染色体步移技术获得覆盖这个基因位点的一组连续的YAC克隆。
③在这个DNA区域内寻找基因,可采用筛选cDNA文库、外显子捕获、物理捕获等方法确定该区域内表达序列的手段和寻找保守序列,寻找基因。