95-D细胞的传代经验

首先要把0.25%的胰酶和培养液在37度水浴20~30分钟(预热)。从培养箱中拿出培养的细胞瓶(一般我是让它长到90%几再传代的)，吸去培养液，可用PBS洗两遍。也可不洗。加入适量0.25%胰酶消化(试瓶子的大小而定，如250毫升的瓶子加1毫升就行了)，让它都浸湿细胞就可以吸去了。

等个三十秒就在手上拍打，不要太用劲。就可以看到细胞脱落了，再加入3毫升左右的培养液吹打(这时加的培养液不要太多，否则难吹打成单个细胞!)，制成细胞悬液，再传至消毒的培养瓶中(我一般是1传三，三天后又可以传代了)再加入适量培养液(如250毫升瓶中加入12~14毫升)。再放置在37度5%CO2培养箱中培养。

在操作过程中要有酒精灯的，瓶口，镊子等可在火上过一下。其他的地方可用75%的酒精消毒。无菌观念要强!