【交流】ＰＣＲ的问题分析

贴出我的问题来晒晒，也很郁闷的一件事。

相同方法提Ｃａｓｅ　＆　Ｃｏｎｔｒｏｌ两组ＤＮＡ，同时扩增片断A(易扩增)，问题Case组结果良好，而Control组没有结果；于是分别混出一支ｍｉｘ。

Ｎａｎｏｄｒｏｐ测浓度：



见二者结果相仿，就又把A扩了一遍。下图中2-7道为模扳上样梯度。



鉴于Nanodrop的比值没有太大偏差，考虑control溶液中的其他未知杂质，采取酚-氯仿-异戊醇重新抽提、乙醇沉淀洗盐纯化，原体积1/2的ddH₂O溶解；少量留原control mix做对照。Nanodrop测浓度，如下：



再次扩A，使用Control Original, Case, ddH₂O作对照。



怀疑Nanodrop结果，用control和case的mix DNA直接走胶，检查模扳质量：



并随后将所有control模扳DNA全部走胶核查了一遍，结果大多如下：



未见明显异常，考虑扩增片断本身难度问题，扩大扩增片段的种类，结果如下：



现在的问题：考虑过以上问题后，还有什么手段去定位问题的出处？或者还有什么可疑之处值得进一步确认，对于control来说？请各位战友不吝赐教！