正常大兔主动脉平滑肌细胞培养

实验材料：

1. 正常大兔主动脉

2. 不含Ca²⁺ 和Mg²⁺ 的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素，pH7.2

3. 消化液：0.125%胰蛋白酶，0.1%胶原酶Ⅰ

4. 细胞培养瓶（T25）

5. 手术刀、解剖剪、解剖镊、眼科剪，眼科镊

6. 网筛（100目）

7. 离心管（15ml、50ml）

实验方法：

1. 处死大兔，分离出主动脉，放入预冷的含双抗的1×PBS（pH=7.2）反复清洗3次。以洗去表面血丝和粘膜；

2. 将清洗过的大动脉剪成2.5 ~ 3cm的血管段，剥离外膜；

3. 将去外膜的血管段放入培养皿中，纵向剪开管壁，然后使内膜朝上，用小刀片轻轻刮去内膜细胞。加1×PBS洗涤中膜3次，将中膜剪成1mm³的组织块；

4. 将组织块移入50ml离心管中，加入适量0.1%胶原酶Ⅰ溶液，在37℃恒温箱中消化1 ~ 3h，至组织块成絮状为止；

5. 1000r/min，离心5min，去上清。再加入0.125%胰蛋白酶溶液，37℃水浴中搅拌消化5 ~ 10min。用含血清的培养基终止消化，吸管轻轻吹打2-3min，以得到分散的平滑肌细胞；

6. 过100目网筛，收集滤液，1000r/min离心5min，弃上清；

7. 加培养液重悬细胞、调整细胞浓度至1×10⁵ 个/ml，接种于培养瓶中，置于37℃、5%CO₂ 的培养箱中培养；

8. 两天后第一次换液，之后每天换液一次。