我的实战酶切心得

互联网2008-08-24

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1、在做多个同类酶切反应预混液时，水要多加1～5微升（当然不能超过预混液总体积的5%），以防止最后一管酶液不够的尴尬局面。

2、记住所用酶的特性，不光体现BUFFER的选择上。也体现记住不同限制酶稳定性上。比如BamHI5小时内稳定（37度），而BglII16小时内都保留100%的活性；那么在用酶时，如果能反应16小时，就可以采用BamHI：BglII=2：1的用量了（为了省钱）。

3、如果反应较长时间而酶切体系又很小，比如10微升，那么哪怕用PCR小管做反应，体积损失也会很大。我采用石蜡油覆盖的方法避免水分损失甘油浓度提高而引起的星活性。

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