丁香实验_LOGO
登录
提问
我要登录
|免费注册
点赞
收藏
wx-share
分享

以反向PCR扩增抗人宫颈癌单克隆抗体重链可变区基因

互联网

1415


关键词: 单链抗体; 重链; 可变区; 反向PCR ; 宫颈癌

  单克隆抗体(mAb) V 区cDNA 序列的克隆是构建单链抗体(ScFv) 的关键一步[1 ] 。通常是在抗体V 区序列两头5′和3′端设计带简并碱基的引物, 用普通PCR 法进行扩增[2 ] 。该法虽看似简单, 但局限性很大, 若遇到同源性差且复杂的序列, 则难以获得。同时, 因带有简并碱基, 可使PCR 产物不纯, 而影响蛋白的表达及其功能。我们在构建抗人宫颈癌ScFv 过程中, 用常规PCR 法扩增出VL cDNA 序列, 经多
种方法尝试, 均未获得VH cDNA 序列。随后, 采用反向PCR 技术扩增并经测序证明, 确为VH cDNA 序列, 为重组制备ScFv 奠定了基础。

下载全文: 以反向PCR扩增抗人宫颈癌单克 隆抗体重.pdf

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序