胶回收纯化DNA
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1. 琼脂糖电泳,将特异电泳带用刀切下放入到 EP 管中,称琼脂糖带的重量;
2. 按照每100mg加 400μl 的量加入binding buffer, 放入到EP管振荡器中, 45℃~55℃温育振荡,直到所有的琼脂糖都溶解(大概要 5 分钟) ;
3. 取出纯化柱,将上述溶解液转移至柱中,室温下放置2 分钟,8,000rpm 离心1 分钟,弃 EP 管中的液体,将纯化柱放回 EP 管中;
4. 加 500μl 的 wash buffer至柱中,8,000rpm 离心 1 分钟。弃管中的溶液;
5. 重复操作 4 步的操作 1 次, 最后将纯化柱放入EP 管中 10,000rpm 离心 30 秒,除去痕量的 wash buffer;
6. 将纯化柱放入一个新的 EP 管。 加30~40μ l H2 O 或者 elutionbuffer 至纯化柱膜 的中央,在37℃或 50℃下放置 2 分钟,10,000rpm 离心 1 分钟洗脱 DNA,将EP 管中的 DNA 溶液放在- 20℃保存。
7. 注:若想要不电泳而直接纯化DNA 溶液,只需要在第2 步中按 100μl 液量加400μ l 的 binding buffer,其余的步骤不变。