关于原代 T 细胞电转 DNA 条件的优化探索

北京生物研究所的团队优化了 CAR-T 生产的电转染条件，可以在 6 天内生产出对肿瘤细胞有正常杀伤效果的 CAR-T 细胞。

无论做基础研究还是在临床的免疫治疗中，拥有一套关于人原代T细胞工程的有效基因转导系统是十分重要的。假病毒系统和电转染是目前最流行的基因转导策略，但与病毒颗粒介导的方法相比，电转染理论上更安全，因为它没有使转导的基因整合到宿主基因组上。此外，电转导具有方便、快捷的有点，使其更有吸引力。在此，北京生物研究所的研究者开发了一种用于生产嵌合抗原受体(CAR)-T 细胞的电转染方法。

结果发现：T 细胞的激活对于转染有着极大的影响，使T细胞激活最多三天可很大地提高转染效率。此外，外部电场的强度、电转的细胞数量和 DNA 的初始量都会显著影响转染结果。电穿孔过程中所施加的电压会影响质粒的渗透，并与电转后的活细胞数呈负相关。质粒的浓度越高，转染效率越高，但会降低细胞活性。对于单激活细胞而言，细胞密度的增加会提高电转后的细胞活性。

研究团队评估了两个临床相关因素的影响，分别是在培养基中补充血清和外周血淋巴细胞分离后立即冷冻保存，对于电转效率的影响。研究团队发现，在使用无异源物的培养基和新鲜分离的T细胞，得到的转染效果很好，但使用胎牛血清或冻存过的细胞时就会降低转染效率。最后，研究团队开发了一种优化的 CAR-T 生产工艺，可以再 6 天内生产出对肿瘤细胞有正常杀伤效果的 CAR-T 细胞。

为了检测体外杀伤中细胞因子的表达量，研究团队会通过 ELISA 的方法进行检测。