平板凝集反应
互联网
材料与试剂
以布氏杆菌病平板凝集反应为例。
1 .玻璃板、刻度吸管等。
2 .布氏杆菌平板凝集抗原、布氏杆菌标准阳性血清。
操作方法
1 .取洁净玻板一块,用玻璃铅笔划成方格,并注明待检血清号码。
2 .取0 . 2 ml 吸管分别吸取 0.08ml 、 0.04ml 、 0.02ml 和 0.01ml 各放入一方格内。大规模检验时,可只做2个血清量,大动物用 0.04ml 和 0.02ml ,中小动物用 0.08ml 和 0.04ml 。每检一个样品需换一只吸管。
3 .每格内加布氏杆菌平板凝集抗原 0.03ml ,滴在血清附近,而不要与血清接触。用牙签(或火柴杆)自血清量最小的一格起,将血清与抗原混匀,每份血清用一根牙签。
4 .混合完毕,将玻板置凝集反应箱上均匀加温或采用别的办法适当加温,使温度达到30℃ 左右。 3min ~ 5min 内记录结果。
结果判定
++++:出现大的凝集块,液体完全清亮透明,即 100 %凝集。
+++ :有明显的凝集片,液体几乎完全透明,即 75 %凝集。
++ :有可见的凝集片,液体不甚透明,即 50 %凝集。
+ :液体混浊,有小的颗粒状物,即 25 %的凝集。
- :液体均匀混浊,即不凝集。
以出现++凝集的血清最高稀释倍数作为该份血清的凝集价。大动物(牛、马、骆驼等)以 0.02ml 出现凝集价判为布氏杆菌病血清阳性, 0.04ml 出现凝集价判为可疑。中小动物(猪、山羊、绵羊等)以 0.04ml 出现凝集价判为该份血清为布氏杆菌病阳性血清, 0.08ml 出现凝集价判为可疑。
注意事项
1 .每次试验必须以标准阳性血清和标准阴性血清进行对照。
2 .加抗原前必须摇匀。
3 .反应温度最好保证在 30 ℃ 左右, 3min ~ 5min 内判定。如反应温度偏低,可适当延
长判读时间。
4 .如用两个血清量作试验,任何一个血清量出现凝集反应时,则需要用四个血清量重检。
5 .平板凝集反应最好是用于初筛,如出现阳性或可疑反应,再用试管凝集反应进行复检,以定性。
6 .平板凝集反应与试管凝集反应的关系。
表 平板凝集反应与试管凝集反应的关系
平 板 凝集 反 应
|
0.08
|
0.04
|
0.02
|
0.01
|
试管凝集反应
|
1 ︰ 25
|
1 ︰ 50
|
1 ︰ 100
|
1 ︰ 200
|