试管凝集反应

一、操作步骤

1.  取洁净小试管14只分两排排列于试管架上，每排7只依次用蜡笔注明号码，于每管中分别加入0.5毫升生理盐水。

2.  在第1排1管中加入1：10稀释伤寒H血清0.5毫升，于管内连续吹吸3次，使血清与盐水充分混合，而后吸出0.5毫升注入第2管，同样予以混匀后吸出0.5毫升注入第3管。依次类推，稀释到第6管，自第6管吸出0.5毫升弃去。此时，自第1管至第6管的血清稀释倍数为1：20，1：40，1：80，1：160，1：320，1：640。第7管不加血清作为对照。

3.  同法用吸管吸取1：10稀释伤寒杆菌O血清加入第2排第1管，并依次如上法予以稀释。

4.  用移液管吸取伤寒杆菌H菌液，加收第1排各管中每管0.5毫升（由盐水对照管开始，依次由后向前加入）此时血清稀释倍数又增加了一倍。

5.  同法于第2排各管中加入伤寒O菌液0.5毫升。

6.  将各管振荡混匀，放37℃水浴箱中2~4小时或37℃孵育箱中过夜次日取出观察结果。

二、观察结果

1.  观察切勿摇动试管，以免凝集块分散。

2.  先看对照管，此管应无凝集现象，管内液体仍成混浊状态。但如放置时间较长，细菌堆于管底成小圆点状，为阴性反应。

3.  试验管应自第1管看起，如有凝集时则于管底有不同大小的圆片状边缘不整齐的凝集物，上清则澄清透明或不同程度混浊。凝集的强弱可用“+”号表示如下：

“++++”凝集很强，管内液体完全澄清，凝集块完全沉于管底。

“+++”凝集强，管内液体不完全澄清稍有轻度混浊，凝集块沉于管底。

“++”凝集中等强度，液体半澄清，凝集块沉于管底。

“+”凝集弱，管内液体混浊，少量凝集块沉于管底。

“－”不凝集，管内液体和对照管同样混浊，无凝集块。

4.  轻轻振荡各管，观察凝集块的状态，对照管的细菌在振荡时呈烟雾状上升，随即消散，细菌分散仍呈混浊状态。“H”菌液的凝集块疏松呈棉状，大片沉于管底轻摇即升起，并极易破碎。“O”菌液凝集呈紧密颗粒状，沉于管底坚实致密，轻轻振摇不易升起，凝集颗粒较小不易摇碎。

5.  记录观察的结果并制定凝集效价。通常以能产生明显凝集（++）的血清大稀释倍数作为该血清的凝集效价。如血清的最低稀释度（即第1管1：40）仍无凝集应报告为低于1：40。如血清的最高稀释度（即第6管1：1280）仍显完全凝集现象。，应报该血清效价高于1：1280。