凝集反应

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当颗粒性抗原 ( 病原微生物或红细胞 ) 与相应抗体持异性结合，在电解质存在下两者比例适当时，可形成肉眼可见的凝集块，此种现象称为凝集反应（ agglutinogen) 。细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合形成肉眼可见的凝集块，称为直接凝集反应。常用的直接凝集试验有玻片法和试管法两种。

　　本实验进行玻片凝集反应实验。

　一、细菌 鉴定

　　玻片凝集反应 (slide agglutination) 是将已知的抗体直接与未知的颗粒性抗原物质( 如细菌、立克次体、钩端螺旋体等 ) 混合，在有适当电解质存在的条件下，如两者对应便发生持异性结合而形成肉眼可见的凝集物，即为阳性；如两者不对应便无凝集物出现，即为阴性。此法属定性试验，主要用于细菌鉴定和分型等。

　【材料】

　1 ．抗原，大肠杆菌 （ E.coli ） 18 — 24h 培养物；

　　抗体， 1 ： 10 兔抗大肠杆菌血清。

　2. 生理盐水。

　3. 洁净载玻片、记号笔、吸管 ( 带乳胶吸头 ) 。

　【方法】

　1.取载玻片一张平置实验台上，用记号笔划分为 2 格，并标明 1 、 2 。

　2.用 1m 1 吸管吸取生理盐水 1 — 2 滴于破片第 1 格内，另取一支吸管，吸取 1 ： 10 兔抗大肠杆菌血清 1 — 2 滴于第 2 格内。

　3.将接种环在酒精灯火焰上烧灼灭菌，冷却后取少许大肠杆菌培养物与第 1 格内的生理盐水混合，并涂抹成均匀悬液。然后用同样方法烷灼接种环，待冷却后取少许大肠杆菌培养物与第 2 格内的兔抗大肠杆菌血清混合并涂抹成均匀悬液。静置数分钟后观察结果。

　【结果观察】

　　如上述混合悬液由均匀混浊状变为澄清透明，并出现大小不等的乳白色凝集块者即为阳性（＋）；如混合物仍呈均匀混浊状则为阴性（－）。如肉眼观察不够清楚，可将玻片置于显微镜下用低倍镜观察。

　　本次实验结果第 1 格内不出现凝集块，反应为阴性。

　【注意事项】

　　取细菌培养物时，不宜过多，与抗血清混合涂抹时，必须将细菌涂散，涂均匀，但不宜涂得太宽，以免很快干涸而影响结果观察。

　二 . 人类 ABO 血型鉴定试验

　　人类 AB() 血型抗原有 A 和 B 两种。 A 型红细胞膜上有 A 抗原， B 型红细胞上有 B 抗原， AB 型有 A 和 B 两种抗原，而 O 型则不含有 A 和 B 抗原。抗 A 、抗 B 分型试剂是分别针对 A 抗原或 B 抗原的特异性抗体。当将已知的抗 A 或抗 B 试剂与受检者红细胞混合时，抗 A 和／或抗 B 血清与红细胞表面上的相应抗原结合而引起红细胞凝集，根据其凝集状况便可判定受试者的血型。