碘同位素标记单克隆抗体

互联网2013-11-14

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同位素标记是一种重要的抗体标记技术，牨 977 年 Yalow 等在放射免疫测定法所作突出贡献而获得医学和生理学诺贝尔奖。 McAb 标记同位素后除应用于放射免疫测定外，还可用于竞争结合试验、体内肿瘤定位等。

　　 ( 一 ) 　原理

　　氯胺桾即对甲苯碘氯胺钠，在水溶液中生成次氯酸，为一种温和氧化剂，当加入到有蛋白质和碘的弱碱水溶液中，可将 I ２氧化为 I ＋并结合到氨基酸上。如标记条件温和，标记后的 McAb 仍具有良好的结合活性，通过放射性同位素强度的测定可反映相应抗原的含量。

　　 ( 二 ) 　方法

　　　　　　在细胞冻存管内加入纯化的 McAb100 μ g ／ 100 μ l ，
　　　　　　再加入 10 μ l 0.05M 磷酸缓冲液
　　　　　　再加入 10 μ l( 含 1mCi)¹²⁵ I

　　　　　　　　　　↓

　　　　　加入 10 μ l 氯胺 -T(5mg ／ ml 溶于 0.05M 磷酸盐缓冲液 ) ，孵育时间不超过 30 秒

　　　　　　　　　　　　　↓

　　　　　　加入 100 μ l 偏重亚硫酸钠 (1.2mg ／ ml 溶于 0.05M 磷酸缓冲液 )

　　　　　　　　　　　　　↓

　　　　　　加入 200 μ l 　 KI 溶液 ( 少许结晶 KI 溶于 0.05M 磷酸缓冲液＋ 4 ％牛血清白蛋白 )

　　　　　　　　　　　　　↓

　　　　　　用 PD10 柱 (Sephadex G25) 除去游离 ¹²⁵ I
　　　　　　用 4 ％ BSA 　 PBS 洗脱

　　　　　　　　　　　　　↓

　　　　　　分部收集， 0.5ml ／管

　　每管取 5 μ l 进行γ计数，计算标记抗体的比活性和标记率

　　　　　　　　　　　结合于 McAb １２５ I 放射性强度 (cpm)
　　　　标记率 ( ％ ) ＝───────────────────
　　　　　　　　　　　　　　总放射性强度 (cpm)

　　　　　　　　　　　　　　　　结合于某一管 McAb 上的放射性强度
　　　　比活性 ( μ Ci ／μ gMcAb) ＝────────────────
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　某一管 McAb 总量

　　 ( 三 ) 　试剂器材

　　 1. 　纯化后的 McAb

　　 2. 　 0.05M 磷酸缓冲液，氯胺桾，偏重亚硫酸钠， KI ， BSA

　　 3. 　 ¹²⁵ I

　　 4. 　有通风装置的超净台，γ计数仪

　　 5. 　 PD10 柱 (Sephadex G25)

　　 ( 四 ) 　注意事项

　　 1. 　严防同位素污染，工作人员必须穿着工作衣，戴口罩、帽子、手套。必须在严密的通风橱或通风超净台中操作。操作前后对实验室环境进行监测。所用 ¹²⁵ I 和标记物应妥善保管。

　　 2. 　如标记细胞因子、激素等，应选用更温和的标记方法，使保持更好的生物学活性。