125I同位素标记单克隆抗体方法

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125I标记单克隆 抗体技术

同位素标记是一种重要的抗体标记技术，牨977年Yalow等在放射免疫测定法所作突出贡献而获得医学和生理学 诺贝尔奖。McAb标记同位素后除应用于放射免疫测定外，还可用于竞争结合试验、体内肿瘤定位等。

(一)　原理

氯胺桾即对甲苯碘氯胺钠，在水溶液中生成次氯酸，为一种温和氧化剂，当加入到有蛋白质和碘的弱碱水溶液中，可将I2氧化为I+并结合到氨基酸上。如标记条件温和，标记后的McAb仍具有良好的结合活性，通过放射性同位素强度的测定可反映相应抗原 的含量。

(二)　方法

　　　　　　在细胞冻存管内加入纯化的McAb100μg／100μl，
　　　　　　再加入10μl 0.05M磷酸缓冲液
　　　　　　再加入10μl(含1mCi)125I

　　　　　　　　　　↓

　　　　　　加入10μl氯胺-T(5mg／ml溶于0.05M
　　　　　　磷酸盐缓冲液)，孵育时间不超过30秒

　　　　　　　　　　　　　↓

　　　　　　加入100μl偏重亚硫酸钠(1.2mg／ml溶于
　　　　　　0.05M磷酸缓冲液)

　　　　　　　　　　　　　↓

　　　　　　加入200μl　KI溶液(少许结晶KI溶于0.05M
　　　　　　磷酸缓冲液＋4％牛血清白蛋白)

　　　　　　　　　　　　　↓

　　　　　　用PD10柱(Sephadex G25)除去游离125I
　　　　　　用4％BSA　PBS洗脱

　　　　　　　　　　　　　↓

　　　　　　分部收集，0.5ml／管

　　每管取5μl进行γ计数，计算标记抗体的比活性和标记率

　　　　　　　　　　　结合于McAb１２５I放射性强度(cpm)
　　　　标记率(％)＝───────────────────
　　　　　　　　　　　　　　总放射性强度(cpm)

　　　　　　　　　　　　　　　　结合于某一管McAb上的放射性强度
　　　　比活性(μCi／μgMcAb)＝────────────────
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　某一管McAb总量

 

(三)　试剂器材

1.　纯化后的McAb

2.　0.05M磷酸缓冲液，氯胺桾，偏重亚硫酸钠，KI，BSA

3.　125I

4.　有通风装置的超净台，γ计数仪

5.　PD10柱(Sephadex G25)

(四)　注意事项

1.　严防同位素污染，工作人员必须穿着工作衣，戴口罩、帽子、手套。必须在严密的通风橱或通风超净台中操作。操作前后对实验室环境进行监测。所用125I和标记物应妥善保管。

2.　如标记细胞因子、激素等，应选用更温和的标记方法，使保持更好的生物学活性。