放射性碘标记:Iodogen碘化法
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此法具有标记率高、反应体积小(3ml水平)、可用低浓度的
125
I原料、对多肽
激素
和蛋白质的免疫活性损失小、稳定等优点,系常规的碘化方法之一。
1.原理 用Iodogen为氧化剂,对蛋白质和多肽抗原进行碘化标记,把 125 I直接引进分子中的酪氨酸残基上。标记过程中被标记样品不与Iodogen混合,标记后取出样品即停止反应,不使用任何还原剂。
2.方法
(1)标记之前,先把Iodogen溶于有机溶剂,涂于管底,并使之干燥。
(2)标记时,将蛋白质溶液10~20μg/10μl(0.5mol/L,pH7.5PB)置于 反应管 中, 反应管 置于冰浴中。碘化时, 125 I与蛋白质克分子之比例为1~1.2。反应时间在温和的连续的搅拌下可达10min,从反应管中转移出反应混合液,使其反应停止。反应液转移到含有200μl0.01mol/L、pH7.2PB和0.15mol/L NaCl溶液中,层析分离前再放置5min,使其未标记的碘离子还原成分子碘,以避免在带有 缓冲液 的柱中使白蛋白碘化。
3.注意事项
(1)涂有Iodogen的反应管,有氮气中密封,并贮存在-20 ℃ 条件下,至少可用3个月。打开管,使用时间很短。
(2)碘化反应时间,7min时标记率达最高,10min时略有减少。PH6.0~8.5时,标记率最高。
(3)Iodogen与蛋白质的比率是标记率的函数。最大的标记率是1克分子的Iodogen与8克分子或再多量之比。
1.原理 用Iodogen为氧化剂,对蛋白质和多肽抗原进行碘化标记,把 125 I直接引进分子中的酪氨酸残基上。标记过程中被标记样品不与Iodogen混合,标记后取出样品即停止反应,不使用任何还原剂。
2.方法
(1)标记之前,先把Iodogen溶于有机溶剂,涂于管底,并使之干燥。
(2)标记时,将蛋白质溶液10~20μg/10μl(0.5mol/L,pH7.5PB)置于 反应管 中, 反应管 置于冰浴中。碘化时, 125 I与蛋白质克分子之比例为1~1.2。反应时间在温和的连续的搅拌下可达10min,从反应管中转移出反应混合液,使其反应停止。反应液转移到含有200μl0.01mol/L、pH7.2PB和0.15mol/L NaCl溶液中,层析分离前再放置5min,使其未标记的碘离子还原成分子碘,以避免在带有 缓冲液 的柱中使白蛋白碘化。
3.注意事项
(1)涂有Iodogen的反应管,有氮气中密封,并贮存在-20 ℃ 条件下,至少可用3个月。打开管,使用时间很短。
(2)碘化反应时间,7min时标记率达最高,10min时略有减少。PH6.0~8.5时,标记率最高。
(3)Iodogen与蛋白质的比率是标记率的函数。最大的标记率是1克分子的Iodogen与8克分子或再多量之比。