环状沉淀反应

互联网2013-11-14

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以炭疽环状沉淀反应为例，此反应又称Ascoli氏反应。

（一）材料与试剂

1．已知炭疽沉淀血清，购买自生物制品所。

2．待测炭疽沉淀抗原

3．试管5mm×50mm、滴管

4．0.3%石炭酸生理盐水

（二）操作方法

1．待测抗原的提取

（1）取可疑为炭疽而死的病畜的实质脏器1g，放入试管或小三角烧瓶中，加生理盐水5ml～10ml，煮沸30min～40min，冷却后用滤纸过滤得清澈的液体，即为待测抗原。

（2）如病料是皮张，可采用冷浸法。将样品高压灭活后，剪成小块并称重，加约5倍的0.5%生理盐水，室温浸泡18h～24小时，滤纸过滤，即为待检抗原。

2．取试管5支（5mm×50mm）置于试管架上，编号。第1、2试管内加炭疽沉淀血清，第3、4试管内加正常血清，第5管内加待检抗原，分别用毛细滴管加至4mm～5mm。

3．第1、4、5试管轻轻叠加等量缓冲液，第2、3试管轻轻叠加等量待检抗原。为防止上下两界面破坏，可将小试管从试管架取出，微倾斜，沿试管壁加入缓冲液或抗原。

4．在试管架上静置数分钟，观察结果。

（三）结果判定

第2管内两液界面出现白色环状沉淀带，其余管无此种沉淀带判为阳性。

（四）注意事项

1．反应物必须清澈，如不清澈，可离心，取上清液或冷藏后使脂类物质上浮，用吸管吸取底层的液体。

2．必须进行对照观察，以免出现假阳性。

3．采用环状沉淀反应，用以沉淀素效价滴定时，可将抗原做100^× ，1 000^× ，2 000^× ，4 000^× ，8 000^× 等稀释，分别叠加于抗血清上，以出现环状沉淀的最大稀释倍数，即为该血清的沉淀素效价。