环状沉淀反应
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以炭疽环状沉淀反应为例,此反应又称Ascoli氏反应。
(一)材料与试剂
1.已知炭疽沉淀血清,购买自生物制品所。
2.待测炭疽沉淀抗原
3.试管5mm×50mm、滴管
4.0.3%石炭酸生理盐水
(二)操作方法
1.待测抗原的提取
(1)取可疑为炭疽而死的病畜的实质脏器1g,放入试管或小三角烧瓶中,加生理盐水5ml~10ml,煮沸30min~40min,冷却后用滤纸过滤得清澈的液体,即为待测抗原。
(2)如病料是皮张,可采用冷浸法。将样品高压灭活后,剪成小块并称重,加约5倍的0.5%生理盐水,室温浸泡18h~24小时,滤纸过滤,即为待检抗原。
2.取试管5支(5mm×50mm)置于试管架上,编号。第1、2试管内加炭疽沉淀血清,第3、4试管内加正常血清,第5管内加待检抗原,分别用毛细滴管加至4mm~5mm。
3.第1、4、5试管轻轻叠加等量缓冲液,第2、3试管轻轻叠加等量待检抗原。为防止上下两界面破坏,可将小试管从试管架取出,微倾斜,沿试管壁加入缓冲液或抗原。
4.在试管架上静置数分钟,观察结果。
(三)结果判定
第2管内两液界面出现白色环状沉淀带,其余管无此种沉淀带判为阳性。
(四)注意事项
1.反应物必须清澈,如不清澈,可离心,取上清液或冷藏后使脂类物质上浮,用吸管吸取底层的液体。
2.必须进行对照观察,以免出现假阳性。
3.采用环状沉淀反应,用以沉淀素效价滴定时,可将抗原做100× ,1 000× ,2 000× ,4 000× ,8 000× 等稀释,分别叠加于抗血清上,以出现环状沉淀的最大稀释倍数,即为该血清的沉淀素效价。