环状沉淀反应

实验五十六 环状沉淀反应

　　一、目的要求

　　通过沉淀素的效价滴定，学习环状沉淀反应的操作方法及结果的观察。

　　二、基本原理

　　沉淀反应与凝集反应的原理基本相同，所不同的是使用的抗原是可溶性的，正因为是可溶性抗原，其单个抗原分子体积小，在单位体积的溶液内所含抗原量多，其总反应面积大，出现反应所需要的抗体量多，因此，试验时是稀释抗原，而不是稀释抗体。引起沉淀反应的抗原称为沉淀原，相应抗体称为沉淀素。

　　环状沉淀反应是使抗原与抗体在沉淀管内形成交界面，然后在此交界面处出现一环状的乳白色沉淀物（图ⅩⅢ-8）。出现此环状反应的抗原最高稀释度即为沉淀素的效价。

　　环状沉淀反应广泛应用于法医学的血迹鉴别和食物掺假的测定。通常这些可疑材料作为抗原，用标准抗血清加以鉴定。它具有用材少的优点，例如衣服等物品上的血迹用生理盐水洗下就可作为抗原进行检查。图ⅩⅢ—8 环状沉淀试验A．有沉淀环的阳性管；B．阴性管Ag：抗原；Ab：抗体

　　三、器材

　　马血清（抗原），兔抗马免疫血清（抗体），正常兔血清，生理盐水；

　　沉淀管（内径约2．5—3．0mm，长约30mm），小试管，毛细吸管，吸管等。

　　四、操作步骤

　　1．取1：25的马血清1ml，用倍比稀释法在小试管中按下表稀释成各种浓度。

　　2．将9个干燥而清洁的沉淀管插在试管架的小孔上，使直立。

　　3．用毛细吸管吸取1：2的兔抗马免疫血清，加入沉淀管底部，每管约两滴。

　　4．用另一毛细吸管吸上面已稀释好的马血清（抗原），按下表加入各管。

　　从最高稀释度加起，加入时，沿管壁徐徐加入，使与下层兔抗马免疫血清之间形成界面，切勿摇动，第8管加生理盐水，第9管加稀释兔血清以作对照。

　　5．于室温中静置15—30分钟后观察结果，在两液面交界处看有无白色环状沉淀出现。

　　6．结果记录的方法是凡有白色环状沉淀者，记“ ”号，没有沉淀者，记“-”号。最大稀释度的抗原与抗体交界面之间还有白色沉淀者，此管的稀释度即为沉淀素的效价。

　　五、实验报告

　　1．结果

　　沉淀素的效价是多少？

　　2．思考题

　　（1）试比较凝集反应与沉淀反应的异同。

　　（2）环状沉淀试验有何特点？