实验76 花粉活力的测定

 

实验76 花粉活力的测定

 

　　通过花粉活力的测定，可以了解花粉的可育性，并掌握不育花粉的形态、生理特征。

 

Ⅰ．碘—碘化钾染色测定法

 

原理

 

　　水稻正常花粉呈圆球形，并积累淀粉较多，通常可用I—KI染成蓝色。发育不良的花粉常呈畸形，不积累淀粉，用I—KI染色，不呈蓝色，而呈黄褐色。

 

仪器药品

 

　　显微镜 　　镊子

　　恒温箱 　　载玻片、　　盖玻片

　　I—KI溶液：取KI2g溶于5─10ml蒸馏水中，然后加入1g I₂ ，待全部溶解后，再加蒸馏水至300ml。贮于棕色瓶中备用。

 

操作步骤

 

　　1．花粉采集：取充分成熟将要开花的花朵带回室内。

　　2．镜检：取一花药置载玻片上，加1滴蒸馏水，用镊子充分捣碎后，再加1─2滴I—KI溶液，盖上盖玻片，置低倍显微镜下观察。

　　凡被染色成蓝色的为活力较强的花粉粒，呈黄褐色的发育不良的花粉粒。

 

Ⅱ．过氧化物酶测定法

 

原理

 

　　具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶。此酶能利用过氧化氢使各种多酚及芳香族胺发生氧化而产生颜色，依据颜色可知花粉有无活性。

 

仪器药品

 

　　显微镜　　　 载玻片

　　盖玻片 　　　镊子

　　1．0.5%联苯胺：将0.5g联苯胺溶于100ml50%乙醇中。

　　2．0.5%α－萘酚：将0.5gα－萘酚溶于100ml50%乙醇中。

　　3．0.25%碳酸钠：将0.25g碳酸钠溶于100ml蒸馏水中。

　　4．0.3%过氧化氢。

　　试验前将溶液1、2、3各10ml混合均匀成试剂I；溶液4为试剂II。

 

操作步骤

 

　　1．在干洁载玻片上放少量花粉，然后加试剂I和II各1滴，搅匀后盖上盖玻片。30℃下经10分钟后在低倍显微镜下观察，如花粉粒为红色，则表示有过氧化物酶存在，花粉有活力，能发芽；如无色或黄色，则表示已失去活力，不能发芽。

　　2．观察2─3个制片，每片取5个视野，统计100粒，并计算其发芽率。

 

Ⅲ．氯化三苯四氮唑法（TTC法）

 

原理

 

　　见实验71种子发芽率的快速测定中的TTC法。

 

仪器药品

 

　　显微镜 　　　　镊子

　　载玻片、　　　盖玻片　　 0.5%TTC溶液（参阅实验71）

 

操作步骤

 

　　1．取少数花粉于载玻乍上，加1─2滴TTC溶液，盖上盖玻片。

　　2．将制片于35℃恒温箱中放置15分钟。然后置于低倍显微镜下观察。凡被染为红色的活力强，淡红的次之，无色者为没有活力的花粉或不育花粉。

　　3．观察2─3个制片，每片取5个视野，统计100粒，然后计算花粉的活力百分率。