实验82 植物缺水程度的鉴定（脯氨酸法）

 

实验82 植物缺水程度的鉴定（脯氨酸法）

 

原理

 

　　当植物缺水时体内的脯氨酸含量增加。植株体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植株体内的水分情况，因而可以作为植物缺水情况的参考性生理指标。

　　用人造沸石（Permutit）在pH1─7范围内振荡溶掖，可除去干扰的氨基酸或使不与茚三酮反应（如甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、缬氨酸、胱氨酸、苯丙氨酸、精氨酸等），脯氨酸与茚三酮试剂呈显色反应，其含量与色度成正相关，可用分光光度计测定。此法有专一性。

 

仪器药品

 

　　721型分光光度计 　 　离心机

　　水浴锅 　　　　　　　烧杯

　　移液管 　　　　　　　研钵

　　容量瓶 　　　　　　　具塞试管

　　冰醋酸　　　　　　　 80%乙醇

　　脯氨酸　　　　　　　 人造沸石

　　茚三酮试剂：将2.50g茚三酮于60ml冰醋酸和40ml 6mol／L磷酸中，加热（70℃）溶解。试剂至少在24小时内稳定。

 

操作步骤

 

　　1．绘制标准曲线

　　取脯氨酸溶于80%乙醇中，然后稀释成下列浓度：0、1.0、2.5、5.0、7.5、10、15、20、25、30μg／ml。分别取标准溶液2ml，冰醋酸2ml，茚三酮试剂2ml加入试管中，用橡皮塞塞紧，于沸水浴中加热15分钟。用分光光度计于波长515nm下进行比色测定，以浓度0为空白对照。将测定结果以脯氨酸浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标作标准曲线。

　　2．植株样品液的提取

　　选取植株功能叶片2g，用3ml80%乙醇研磨（放少许石英砂）成浆状。用80%乙醇洗研钵，将提取物和洗液置于试管中。80%乙醇总量为10ml。加盖置于黑暗中室温下提取24小时。

　　将提取液在放有活性炭的滤纸上进行过滤，重复过滤一次，除去色素和残渣。将提取液置于试管中，加其重量1／5的人造沸石强烈振荡5分钟。将上层液在离心机上离心10分钟，取上清液备用。

　　3．样品溶液之测定

　　将离心后所得之上层液，取2ml置于试管中，再加入2ml冰醋酸和2ml茚三酮试剂，加盖密封，在沸水浴上加热15分钟。用3ml80%乙醇代替样品液作为对照。在分光光度计上用515nm进行比色测定。读出吸光度后，从标准曲线上求出样品溶液中脯氨酸含量。