影响电泳迁移率的因素

互联网2013-11-14

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⒈电场强度 电场强度是指单位长度（ cm）的电位降，也称电势梯度。如以滤纸作支持物，其两端浸入到电极液中，电极液与滤纸交界面的纸长为 20cm，测得的电位降为 200V，那么电场强度为 200V/20cm＝ 10V/cm。当电压在 500V以下，电场强度在 2-10v/cm时为常压电泳。电压在 500V以上，电场强度在 20-200V/cm时为高压电泳。电场强度大，带电质点的迁移率加速，因此省时，但因产生大量热量，应配备冷却装置以维持恒温。

⒉溶液的 pH 值 溶液的 pH决定被分离物质的解离程度和质点的带电性质及所带净电荷量。例如蛋白质分子，它是既有酸性基团（ -COOH），又有碱性基团（ -NH2 ）的两性电解质，在某一溶液中所带正负电荷相等，即分子的净电荷等于零，此时，蛋白质在电场中不再移动，溶液的这一 pH值为该蛋白质的等电点（ isoelctric point， pI）。若溶液 pH处于等电点酸侧，即 pH＜ pl，则蛋白质带正电荷，在电场中向负极移动。若溶液 pH处于等电点碱侧，即 pH＞ pl，则蛋白质带负电荷，向正极移动。溶液的 pH离 pl越远，质点所带净电荷越多，电泳迁移率越大。因此在电泳时，应根据样品性质，选择合适的 pH值缓冲液。

⒊溶液的离子强度 电泳液中的离子浓度增加时会引起质点迁移率的降低。其原因是带电质点吸引相反符合的离子聚集其周围，形成一个与运动质点符合相反的离子氛（ ionic atmosphere），离子氛不仅降低质点的带电量，同时增加质点前移的阻力，甚至使其不能泳动。然而离子浓度过低，会降低缓冲液的总浓度及缓冲容量，不易维持溶液的 pH值，影响质点的带电量，改变泳动速度。离子的这种障碍效应与其浓度和价数相关。可用离子强度 I表示。

⒋电渗 在电场作用下液体对于固体支持物的相对移动称为电渗（ electro-osmosis）。其产生的原因是固体支持物多孔，且带有可解离的化学基团，因此常吸附溶液中的正离子或负离子，使溶液相对带负电或正电。如以滤纸作支持物时，纸上纤维素吸附 OH- 带负电荷，与纸接触的水溶液因产生 H3 O ，带正电荷移向负极，若质点原来在电场中移向负极，结果质点的表现速度比其固有速度要快，若质点原来移向正极，表现速度比其固有速度要慢，可见应尽可能选择低电渗作用的支持物以减少电渗的影响。