质粒(plasmid)
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许多细菌除了染色体外,还有大量很小的环状DNA分子,这就是质粒(plasmid)。质粒上常有抗生素的抗性基因,例如,四环素抗性基因或卡那霉素抗性基因等。有些质粒称为附加体(episome),这类质粒能够整合进细菌的染色体,也能从整合位置上切离下来成为游离于染色体外的DNA分子。
有些质粒能够整合进细菌的染色体,当细菌接合时将随同“雄性”细菌染色体而转移进入“雌性”细菌细胞,所以质粒也是细菌的一种可动遗传因子。但有些质粒不能整合进细菌染色体,因而在细菌接合时也就无法转移到另一个细胞中,这类质粒是不移动的遗传因子,这种质粒上所带的基因也无法转移。上面所说的是指天然状态下的情况,在基因工程的实验条件下,各种质粒都能转染经过处理的感受态细菌细胞(competent cell)而转移进细菌。质粒在宿主细胞中的拷贝数取决于质粒和宿主细胞的遗传组成。由此,质粒可分为两种类型:一种是松弛型质粒,它们可独立于宿主染色体的复制而自行增殖,一个宿主细胞中平均有10~200份拷贝;另一种是严紧型质粒,它们随宿主染色体同步复制,所以每个宿主细胞中只有一份或很少几份拷贝。
质粒是环状双链DNA分子,同线状DNA分子相比,围绕双螺旋主轴连续排列的核苷酸的旋转角度稍有变动,就更容易使DNA分子的构象发生改变,即出现超螺旋的(supercoiled)构象。这是比环状更为致密的一种构象,因此当离心沉降或电泳时,超螺旋构象的DNA分子的沉降速度和电泳速度都快于线性分子和环状分子。以前曾认为超螺旋构象是在实验条件下出现的一种现象,现在在细胞里也发现有超螺旋构象的DNA分子,而且发现超螺旋的程度是受拓扑异构酶(topoiso—merase)和旋转酶(gyrase)控制的,并和DNA调控蛋白与DNA链的接触有关。
有些质粒能够整合进细菌的染色体,当细菌接合时将随同“雄性”细菌染色体而转移进入“雌性”细菌细胞,所以质粒也是细菌的一种可动遗传因子。但有些质粒不能整合进细菌染色体,因而在细菌接合时也就无法转移到另一个细胞中,这类质粒是不移动的遗传因子,这种质粒上所带的基因也无法转移。上面所说的是指天然状态下的情况,在基因工程的实验条件下,各种质粒都能转染经过处理的感受态细菌细胞(competent cell)而转移进细菌。质粒在宿主细胞中的拷贝数取决于质粒和宿主细胞的遗传组成。由此,质粒可分为两种类型:一种是松弛型质粒,它们可独立于宿主染色体的复制而自行增殖,一个宿主细胞中平均有10~200份拷贝;另一种是严紧型质粒,它们随宿主染色体同步复制,所以每个宿主细胞中只有一份或很少几份拷贝。
质粒是环状双链DNA分子,同线状DNA分子相比,围绕双螺旋主轴连续排列的核苷酸的旋转角度稍有变动,就更容易使DNA分子的构象发生改变,即出现超螺旋的(supercoiled)构象。这是比环状更为致密的一种构象,因此当离心沉降或电泳时,超螺旋构象的DNA分子的沉降速度和电泳速度都快于线性分子和环状分子。以前曾认为超螺旋构象是在实验条件下出现的一种现象,现在在细胞里也发现有超螺旋构象的DNA分子,而且发现超螺旋的程度是受拓扑异构酶(topoiso—merase)和旋转酶(gyrase)控制的,并和DNA调控蛋白与DNA链的接触有关。