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凝胶选择指导

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3202

<font>Invitrogen提供了大量的涵盖面广的蛋白分离预制胶,包括不同的成分,百分比浓度和格式。使用合适的胶百分比浓度,缓冲系统,上样孔格式以及胶的厚度,对于获得最好的结果非常重要。以下提供了帮助你选择适合你应用的正确凝胶的信息。</font>

<font><strong>E-PAGE™ 96 High-Throughput System</strong> 是整合的、无缓冲液系统,设计用来检测和分析大量的蛋白样品,时间仅仅需要14分钟。</font>

<font><strong>NuPAGE® Novex Gels</strong> 组合了完美的技术和极度的可靠性。货架期长达12个月,比其它蛋白凝胶需要的电泳时间更短,中性pH值,为大多数蛋白的分离和转移提供优良的性能。现在可以获得8个分离范围,分离绝大多数不同大小的蛋白。</font>

<font><strong>Novex® Tris-Glycine Gels</strong> 基于传统的Laemmli buffer system,可能被使用在所有鞍椎姆掷搿Mü�nvitrogen公司可以获得12种不同百分比浓度和加样孔大小的凝胶。</font>

<font><strong>Novex® Tricine Gels</strong> 是分离肽和低分子量蛋白的理想凝胶。</font>

<font><strong>Novex® Zymogram Gels</strong> 使用gelatin或者casein作为底物分离活性蛋白酶,可以鉴定蛋白酶的大小和活性。</font>

<font>预制聚丙烯酰胺凝胶一般信息:</font>

<font>基质: 聚丙烯酰胺<br /> 厚度: 1.0mm或者1.5mm<br /> 大小: 8cm(h)x8cm(w)<br /> cassette 大小: 10cm(h)x 10cm(w)<br /> 加样孔格式:17孔,15孔,12孔,10孔,9孔,5孔,1孔,2D/准备 孔或者IPG孔<br /> 堆积胶:大多数Novex® gels为4%堆积胶</font>

<font>~undefined Novex®预制胶适用于XCell SureLock™ Mini-cell和大部分其它设计为10cm(h)×10cm(w)gel cassette的mini-cells。E-PAGETM预制胶适用于E-Gel® Base,E-Gel® PowerBaseTMv.4或者E-Base™单元。</font>

<font>选择合适的凝胶百分比浓度</font>

<font>一般而言,分离分子的大小应该决定你选择丙烯酰胺的浓度。使用低百分比浓度凝胶分离较大的分子,高百分比浓度的凝胶分离较小的分子。进行等电聚焦时,这条规则例外。参看凝胶迁移图发现最适合你应用的凝胶。通常,为了达到最佳的分辨率,分子应该移动通过凝胶长度的70%。当蛋白分子量范围宽或者未知,梯度胶通常是最好的选择。</font>

<font>选择加样孔格式和凝胶厚度</font>

<font>我们提供大部分聚丙烯酰胺凝胶为9孔的格式(17孔,15孔,12孔,10孔,9孔,5孔,1孔,2D/准备 孔或者IPG孔)。一些类型的凝胶可以得到两种厚度(1.0mm和1.5mm)。如果上样量大(>30μl)时,使用较厚的凝胶(1.5mm)和较少的上样孔(5孔)更为合适。如果blotting,记住蛋白从1.0mm的凝胶中比从1.5mm的厚胶中更容易转移。表1总结了各种类型凝胶的特定和应用。使用表2确定哪一种上样孔格式最适合容纳你的样品量。</font>

<font><strong>表1</strong> 选择使用胶的类型 </font>
<font> </font> <font>胶的类型</font> <font>胶浓度</font> <font>分离范围</font> <font>货架期</font> <font>平均电泳时间</font> <font>应 用</font>
<font>蛋白质分析</font> <font>E-PAGE™ 96</font> <font>6%</font> <font>10-200 kDa</font> <font>1年</font> <font>14分钟</font> <font>高通量、变性蛋白的分离,以进行重组生产分析和蛋白谱研究,可以电泳后染色和western blots</font>
<font>NuPAGE® Bis-tris</font> <font>10%,12%,4-12%</font> <font>1.5-300 kDa</font> <font>1年</font> <font>35-50分钟</font> <font>pH中性,12个月货架期凝胶。对于变性和还原蛋白具有优良的分辨率。是分析小到中等大小蛋白的最佳选择。</font>
<font>NuPAGE® Bis-Acetate</font> <font>7%,3-8%</font> <font>30-400 kDa</font> <font>8个月</font> <font>60分钟</font> <font>8个月货架期的高性能凝胶。对于较大的蛋白效果极佳。也能够用来做非变性电泳(native)。</font>
<font>Tris-Glycine</font> <font>4%,6%,8%,10%,12%,4-20%,4-12%,14%,16%,18%,8-16%,10-20%</font> <font>6-500 kDa</font> <font>1-2月</font> <font>90分钟</font> <font>准确和可重复的分离非变性(native)和变性蛋白。可以得到各种范围的Laemmli-style 凝胶。</font>
<font>Tricine</font> <font>10%,16%,10-20%</font> <font>2-200 kDa</font> <font>1-2月</font> <font>90分钟</font> <font>小肽的分离</font>
<font>IEF</font> <font>pH3-7,pH3-10</font> <font>pI3.0-pI8.5</font> <font>5月</font> <font>150分钟</font> <font>根据等电点分离可溶性蛋白。</font>
<font>Zymogram</font> <font>10%(gelatin),12%(casein),4-16%(casein)</font> <font>30-200 kDa</font> <font>2个月</font> <font>90分钟</font> <font>利用casein 和gelatin作为底物,确定特别活性蛋白酶。</font>

<font><strong>表2</strong> 获得最佳结果的推荐上样量 </font>
<font>聚丙烯酰胺凝胶</font> <font>1孔</font> <font>IPG孔</font> <font>2D孔 </font> <font>5孔</font> <font>9孔</font> <font>10孔</font> <font>12孔</font> <font>15孔</font> <font>17孔</font>
<font> </font> <font> </font> <font> </font> <font> </font> <font> </font> <font> </font> <font> </font> <font> </font> <font> </font> <font> </font>
<font>最大上样量/孔</font> <font>1.0 mm厚度</font> <font>700 µl</font> <font>7 cm IPG条</font> <font>400 µl</font> <font>60 µl</font> <font>28 µl</font> <font>25 µl</font> <font>20 µl</font> <font>15 µl</font> <font>15 µl</font>
<font>1.5 mm厚度</font> <font>n/a </font> <font>n/a</font> <font>600 µl</font> <font>n/a</font> <font>n/a</font> <font>37 µl</font> <font>n/a</font> <font>25 µl</font> <font>n/a</font>
<font>推荐获得最佳分辨率的最大上样量~8lt~J~Hfont~8gt~J~K~Htd~M~2~1~0~0~0~0~0~0~0~Ktd~M~2~1~0~0~0~0~0~0~0~0~8lt~Jfont~8gt~J每条蛋白带,考马斯亮兰染色</font> <font>12 µg</font> <font>n/a</font> <font>12 µg</font> <font>2 µg</font> <font>0.5 µg</font> <font>0.5 µg</font> <font>0.5 µg</font> <font>0.5 µg</font> <font>0.5 µg</font>
<font>注释:E-Gel® 要求20μl样品量/孔 。<br /> ~undefinedNuPAGE®胶比Tris-Glycine 或Tricine有更高的蛋白上样能力。</font>

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