凝胶选择指导

互联网2013-09-06

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Invitrogen提供了大量的涵盖面广的蛋白分离预制胶，包括不同的成分，百分比浓度和格式。使用合适的胶百分比浓度，缓冲系统，上样孔格式以及胶的厚度，对于获得最好的结果非常重要。以下提供了帮助你选择适合你应用的正确凝胶的信息。

E-PAGE™ 96 High-Throughput System 是整合的、无缓冲液系统，设计用来检测和分析大量的蛋白样品，时间仅仅需要14分钟。

NuPAGE® Novex Gels 组合了完美的技术和极度的可靠性。货架期长达12个月，比其它蛋白凝胶需要的电泳时间更短，中性pH值，为大多数蛋白的分离和转移提供优良的性能。现在可以获得8个分离范围，分离绝大多数不同大小的蛋白。

Novex® Tris-Glycine Gels 基于传统的Laemmli buffer system，可能被使用在所有鞍椎姆掷搿Ｍü�nvitrogen公司可以获得12种不同百分比浓度和加样孔大小的凝胶。

Novex® Tricine Gels 是分离肽和低分子量蛋白的理想凝胶。

Novex® Zymogram Gels 使用gelatin或者casein作为底物分离活性蛋白酶，可以鉴定蛋白酶的大小和活性。

预制聚丙烯酰胺凝胶一般信息：

基质：聚丙烯酰胺
厚度： 1.0mm或者1.5mm
大小： 8cm（h）x8cm（w）
cassette 大小： 10cm（h）x 10cm（w）
加样孔格式：17孔，15孔，12孔，10孔，9孔，5孔，1孔，2D/准备孔或者IPG孔
堆积胶：大多数Novex® gels为4％堆积胶

选择合适的凝胶百分比浓度

一般而言，分离分子的大小应该决定你选择丙烯酰胺的浓度。使用低百分比浓度凝胶分离较大的分子，高百分比浓度的凝胶分离较小的分子。进行等电聚焦时，这条规则例外。参看凝胶迁移图发现最适合你应用的凝胶。通常，为了达到最佳的分辨率，分子应该移动通过凝胶长度的70％。当蛋白分子量范围宽或者未知，梯度胶通常是最好的选择。

选择加样孔格式和凝胶厚度

我们提供大部分聚丙烯酰胺凝胶为9孔的格式（17孔，15孔，12孔，10孔，9孔，5孔，1孔，2D/准备孔或者IPG孔）。一些类型的凝胶可以得到两种厚度（1.0mm和1.5mm）。如果上样量大（＞30μl）时，使用较厚的凝胶（1.5mm）和较少的上样孔（5孔）更为合适。如果blotting，记住蛋白从1.0mm的凝胶中比从1.5mm的厚胶中更容易转移。表1总结了各种类型凝胶的特定和应用。使用表2确定哪一种上样孔格式最适合容纳你的样品量。

表1 选择使用胶的类型
	胶的类型	胶浓度	分离范围	货架期	平均电泳时间	应用
蛋白质分析	E-PAGE™ 96	6%	10-200 kDa	1年	14分钟	高通量、变性蛋白的分离，以进行重组生产分析和蛋白谱研究，可以电泳后染色和western blots
NuPAGE® Bis-tris	10%,12%,4-12%	1.5-300 kDa	1年	35-50分钟	pH中性,12个月货架期凝胶。对于变性和还原蛋白具有优良的分辨率。是分析小到中等大小蛋白的最佳选择。
NuPAGE® Bis-Acetate	7%,3-8%	30-400 kDa	8个月	60分钟	8个月货架期的高性能凝胶。对于较大的蛋白效果极佳。也能够用来做非变性电泳（native）。
Tris-Glycine	4%,6%,8%,10%,12%,4-20%,4-12%,14%,16%,18%,8-16%,10-20%	6-500 kDa	1-2月	90分钟	准确和可重复的分离非变性（native）和变性蛋白。可以得到各种范围的Laemmli-style 凝胶。
Tricine	10%,16%,10-20%	2-200 kDa	1-2月	90分钟	小肽的分离
IEF	pH3-7，pH3-10	pI3.0-pI8.5	5月	150分钟	根据等电点分离可溶性蛋白。
Zymogram	10%(gelatin),12%(casein),4-16%(casein)	30-200 kDa	2个月	90分钟	利用casein 和gelatin作为底物，确定特别活性蛋白酶。

表2 获得最佳结果的推荐上样量
聚丙烯酰胺凝胶	1孔	IPG孔	2D孔	5孔	9孔	10孔	12孔	15孔	17孔

最大上样量/孔	1.0 mm厚度	700 µl	7 cm IPG条	400 µl	60 µl	28 µl	25 µl	20 µl	15 µl	15 µl
1.5 mm厚度	n/a	n/a	600 µl	n/a	n/a	37 µl	n/a	25 µl	n/a
推荐获得最佳分辨率的最大上样量~K~Hfont~M~K~Htd~M~2~1~0~0~0~0~0~0~0~Ktd~M~2~1~0~0~0~0~0~0~0~0~Kfont~M每条蛋白带，考马斯亮兰染色	12 µg	n/a	12 µg	2 µg	0.5 µg	0.5 µg	0.5 µg	0.5 µg	0.5 µg
注释：E-Gel®　要求20μl样品量/孔　。 ~undefinedNuPAGE®胶比Tris-Glycine 或Tricine有更高的蛋白上样能力。