大鼠葡萄糖依赖性促胰岛素激素EIA试剂盒使用说明
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大鼠 葡萄糖依赖性促胰岛素激素 EIA 试剂盒使用说明
原理
本实验采用双抗体夹心 ELISA 法。用抗大鼠 GIP 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 GIP 与单抗结合，加入酶标抗体，形成免疫复合物连接在板上，加入酶底物 TMB ，出现蓝色，加终止液硫酸，颜色变黄，在 450nm 处测 OD 值， GIP 浓度与 OD 值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中 GIP 浓度。
试剂盒组成 （ 2<chmetcnv>-8<span>℃</span> </chmetcnv> 保存）
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酶标 板（ Coated Wells ） |
96 孔 |
酶标抗体工作液（ Enzyme Conjugate ） |
6ml |
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标准品（ Standards ）： 6 瓶 |
一套 |
20 ×浓缩洗涤液（ Wash Buffer ） |
50ml |
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封板纸 |
一张 |
底物工作液（ TMB Solution ） |
12ml |
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坐标纸 |
一张 |
终止液 （ Stop Solution ） |
12ml |
准备试剂与收集血样
1. 收集标本：血清、血浆（ EDTA 、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测， 2<chmetcnv>-8<span><span>℃</span> </span> </chmetcnv> 保存 48 小时；更长时间须冷冻（ <chmetcnv><span>-20<sup> </sup> ℃</span> </chmetcnv> 或 <chmetcnv><span>-70<sup> </sup> ℃</span> </chmetcnv> ）保存，避免反复冻融。
2. 标准品第一次使用时用 0.5ml 的标本稀释液溶解，放置半小时混匀后使用，用后放在 -20o C 保存。溶解后浓度分别为 14 、 8 、 3.2 、 1.6 、 0.8 、 0 ng /ml 。
3. 洗涤液：用重蒸水 1:20 稀释（示例： 1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水）
检测程序
1. 建立标准曲线：设标准孔 6 孔，每孔各加入标准品 50ul 。
2. 加样：待测品孔每孔各加入待测样品 50ul 。
3. 每孔加酶标抗体工作液 50ul 。将反应板置 37 ℃ 120 分钟。
4. 洗板：同前。
5. 每孔加入底物工作液 100ul ，置 <chmetcnv><span>37<sup> </sup> </span> <span>℃</span> </chmetcnv> 暗处反应 15 分钟。
6. 每孔加入 100ul 终止液混匀。
7. 30 分钟内用酶标仪在 45 0nm 处测 吸光值。
结果计算与判断
1. 所有 OD 值都应减除空白值后再行计算。
2. 以标准品 14 、 8 、 3.2 、 1.6 、 0.8 、 0 ng /ml 为横坐标， OD 值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。
3. 根据样品 OD 值在该曲线图上查出相应 GIP 含量。
试剂盒性能
1. 灵敏度 ： 最小的 GIP 检测浓度小于 0.4 ng /ml 。
2. 特异性： 可同时检测重组或天然的大鼠 GIP 。 不与 大鼠其它细胞因子有交叉反应。
3. 重复性：板内、板见变异系数均小于10 ％。
注意事项
1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。
2. 洗涤过程 很关键。洗涤不充分将导致精确度误差及 OD 值错误地升高。
3. 板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥 。
4. 本试剂盒宜置 4o C<, /SPAN>冰箱保存。
5. 本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！
