病毒的鸡胚培养

 

目的意义：

了解禽源病毒鸡胚培养的意义及用途
掌握病毒鸡胚培养的基本方法
基本原理：

鸡胚培养是培养某些病毒常用方法,此方法可用于某些病毒的分离、增殖、毒力滴定、中和试验及生产疫苗等。

病毒接种鸡胚的途径有多种，主要有卵黄囊接种、绒毛尿囊腔接种、绒毛尿囊膜接种、羊膜腔接种途径等，应根据需要选择适当的途径。

器材及试剂:

病毒：鸡新城疫病毒弱毒疫苗；

鸡胚：9-11日龄白壳受精卵；

孵卵箱、检卵灯、钢针、注射器、2.5%碘酒、

75%乙醇、固体石蜡、眼科剪、眼科镊等。

实验步骤:

1 . 准备鸡胚：接种前用检卵灯观察是否为受精卵及其活力。

鸡胚发育正常，可见清晰的血管及活动的鸡胚，。未受精和死胚胚体固定在一端不动，看不到血管或血管消散，应剔除。

鸡胚的日龄根据接种途径和接种材料而定。

　　　（1）卵黄囊接种，选用6～8日龄的鸡胚；

　　　（2）绒毛尿囊腔接种，用9～10  龄鸡胚；

　　　（3）绒毛尿囊膜接种，用9～13日龄的鸡胚。

2接种（本实验选择绒毛尿囊腔途经）：

（1）在检卵灯下，用铅笔勾出气室及胚胎的位置，并在尿囊膜血管较少的地方作记号。

（2）消毒：用碘酒消毒气室蛋壳，酒精脱碘，用灭菌钢针在记号处打一孔。

（3）接种病毒：用9＃针头1ml注射器吸取鸡新城疫病毒，针头通过打出的孔进针，刺入尿囊腔，注入0.1～0.2ml。

（4）用融化的石蜡封闭小孔，39℃孵化器中孵化72h。

3收获： 接种后每4小时照蛋一次，弃去24h内死亡胚。

（1）鸡胚放入普通冰箱内冷藏12h，使胎血凝固。

（2）分别用碘酒和酒精消毒卵壳，用灭菌剪刀除去气室卵壳及壳膜，开口直径为整个气室区大小，以无菌镊子撕去一部分蛋膜，撕破绒尿膜而不撕破羊，膜，用镊子轻轻按住胚胎，以无菌吸管或消毒。

（3）将鸡胚稍倾向一侧，注射器吸取绒毛尿囊液置于无菌试管中，多时可收获5～8mL，将收获的材料低温保存。收获时注意将吸管尖置于胚胎对面，管尖放在镊子两头之间。若管尖不放镊子两头之间，游离的膜便会挡住管尖吸不出液体。

（4）收集的液体应清亮，混浊则表示有细菌污染。最后取2滴绒毛尿囊液滴于斜面培养基上放在温箱培养作无菌检查。无菌检查不合格，收集材料废弃。

思考题：

1、鸡胚接种时应注意哪些事项?