靶向克隆法
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靶向克隆法是一种新的基因克隆方法,该克隆方法的特点是:在基因克隆过程中不使用已有的 DNA Ligase ,而是使用新开发的靶向克隆酶。靶向克隆酶能够使末端序列相同的双链 DNA(14bp-18bp) 同源重组,从而达到克隆基因的目的。
LP Recco 酶,中文名:靶向克隆酶,无需传统基因克隆所需要的限制性内切酶和连接酶,使基因克隆位点选择的限制性大大减少;能在一天之内完成从 PCR 开始到转化的全部过程;阳性克隆不存在方向相反的问题,百分之百的正向连接;如果实验顺利, 2 - 3 天即可得到研究人员所需要的克隆。而传统的克隆方法由于需要寻找与需要克隆的基因和载体相适应的限制性内切酶位点、连接酶连接以及挑选方向正确的阳性克隆,整个过程需要两个星期到三个月不等,有时由于找不到合适的限制性内切酶位点,甚至根本无法克隆研究人员感兴趣的基因。 LP Recco 酶将为基因克隆技术带来一场革命性的变革。
◆ LP Recco 酶特点 :
l 准确、定向克隆 PCR 扩增的基因片断
l 无需限制性内切酶
l 不用去磷酸化载体,无需连接酶
l 适用任何类型的克隆载体、插入片断和酶切位点
l 只要线性化载体就行(单酶切、双酶切均可),不用酶切 PCR 产物,不用补平末端
l 可使用任何类型的 Taq 酶(常规 Taq 、各种高保真酶均可)的扩增产物
l 操作简单,将混合物 25 ℃ 孵育 30min 即可转化
l 可克隆长达 12Kb 的基因片断
l 克隆效率高,转化率高
l 重复性高、可靠性好――可用于高通量操作,批量克隆