细胞生长检测2：MTT检测法

MTT 检测法

 

1． 取 96 孔细胞培养板，每孔中加 0.1ml 含 2 × 10⁴ ～ 10 × 10⁴ 靶细胞的培养液（含 10 ％小牛血清的 RPMI-1640 培养液），在 37 ℃ 5 ％ CO₂ 的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养 2 ～ 3 小时让细胞帖壁（如果是悬浮细胞可直接进行下一步）

2． 用 RPMI-1640 培养液 2 ～ 10 倍递次稀释细胞因子标准品，根据情况 2 ～ 5 倍递次稀释待检样品，每孔加 0.1ml 稀释的标准品和待检样品，每个稀释度 3 个重复孔。对照孔 6 个： 3 个阳性对照孔，每孔加 0.1ml 含大剂量细胞因子的 RPMI-1640 培养液， 3 个阴性对照孔，每孔加 0.1ml RPMI-1640 培养液。在 37 ℃ 5 ％ CO₂ 的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养 24 ～ 48 小时或预定的时间。

3． 吸去培养液，用 PBS 洗涤一次（如为悬浮细胞，应在吸去上清液前离心培养板）。

4． 每孔加 0.1ml PBS 和 10 μ l MTT 染液，在 37 ℃ 5 ％ CO₂ 的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养 4 ～ 6 小时。

5． 每孔加 0.1ml 酸化异丙醇，也可用含 10 ％ SDS 的 10mmol/L HCl 代替酸化异丙醇，在振荡器上振荡混匀，让还原产物充分溶解。置酶联检测仪上测定光密度（ OD ）值，检测波长 570nm ，参考波长 630nm 。以 OD 值对样品稀释度作图，比较标准曲线和待测样品曲线即可求得待测样品中细胞因子的含量。