药物对离体豚鼠冠脉流量的影响

药物对离体豚鼠冠脉流量的影响

 

 

 

 

I.        目的

 

 

a)        掌握离体心脏灌流实验的方法

 

 

b)      观察药物对离体豚鼠心脏冠脉流量的影响

 

 

c)      学习自身对照 t 检验的统计方法

 

 

II.       原理

 

 

           i.    离体心脏实验最常用的方法：

 

 

a)        八木氏法

 

 

b)        Straub 法

 

 

c)        Langendorff 法

 

 

前两种方法适用于观察药物对两牺类动物青蛙、蟾蜍、等离体心脏，主要观察药物直接对心脏收缩力、传导与心输出量的影响。 Langendorff 法适用于研究药物对哺乳类动物兔、豚鼠、大白鼠和猫等离体心脏的影响，观察药物对心肌的直接作用，还可以观察药物对冠脉流量的影响。

 

 

         ii.    离体实验条件：供氧、供能、恒温、恒压

 

 

        iii.    冠脉循环的解剖特点：心肌的血液供应来自左右冠状动脉。冠状动脉的两个开口在主动脉根部动脉瓣上方，分别叫做左前窦、右后窦。左右冠状动脉及其分支的走向可有多种变异。左冠状动脉主要供应左心室的前部，右冠状动脉主要供应左心室的后部和右心室。左冠状动脉的血液流经毛细血管和静脉后，主要经由冠脉窦回流入右心房，而右冠状动脉的血液则主要经较细的心前静脉直接回流入右心房。另外还有一小部分冠脉血液可通过心最小静脉直接流入左、右心房和心室腔内。

 

 

       iv.    灌流方法：采用逆血流方向灌注营养液，主动脉瓣关闭，营养液经冠状动脉开口进入心脏冠脉循环，再经由左右心房、心室从上下腔静脉、肺静脉等断口处流出。

 

 

         v.    与冠脉流量相关因素： ， Q 为冠脉流量， P 为灌注压， R 为冠脉阻力 , 为粘滞系数， 为血管长度， r 为血管半径。若 P 恒定， 不变，则 Q 与 r 成正比。

 

 

III.       材料：

 

 

                         i.  动物：豚鼠；标本：心脏

 

 

                       ii.  器材：恒温装置、供氧系统、恒压装置、主动脉套管、手术器械

 

 

                      iii.  药品：复方丹参注射液

 

 

　　　垂体后叶素 0.1ug/ml

 

 

　　　异丙肾 10ug/ml

 

 

IV.      方法：

 

 

                         i.  调节仪器：温度 37 ± 0. 5℃，氧气2-3个/s，压力40-60cm水柱

 

 

                       ii.  制备标本：

 

 

a)        击昏豚鼠，剪胸部腹皮，自剑突处剪开胸骨，迅速打开胸腔，暴露心脏，，左手轻轻拿住心脏，剪断上下腔静脉、肺动脉、主动脉及心脏周围的组织，摘出心脏。

 

 

b)        用手指轻轻挤压心脏，使心室内残血排出

 

 

c)        去除心包膜，找到主动脉。

 

 

d)        修剪连接在心脏上的肺叶、气管等累赘物

 

 

e)        将主动脉挂在主动脉套管上，供给离体条件。

 

 

                      iii.  稳定标本

 

 

连续测定每分冠脉流量，连续三次测定结果相差不大于 0.5ml 为稳定。一般需 5-10min.

 

 

                     iv.  给药：从侧枝沿营养液流向注射药物，快速推注，测定连续 10min 的每分冠脉流量，取极值计算。

 

 

a)        复方丹参注射液 0.2ml

 

 

b)        垂体后叶素 0.1ml

 

 

c)        异丙肾 0.1ml

 

 

V.         结果处理

 

 

1. 流量增减百分率＝

 

2. 汇集全班数据进行自身对照 t 检验

 

 

配对设计主要有以下情形：

 

 

a)        两同质受试对象分别接受两种不同的处理

 

 

b)        同一受试对象分别接受两种不同处理

 

 

c)        同一受试对象（一种）处理前后

 

 

　检验步骤：

 

 

a)        无效假设：假设给药前后冠脉流量无变化

 

 

b)        计算 t 值

 

 

　　　

 

c)        确定 P 值

 

 

自由度 n ＝ n-1

 

 

查附录１的表１查 t_{( n )0.05} ,t_{( n )0.01}

 

 

若 t ＞ t_{( n )0.05} 或 t_{( n )0.01} ， P ＜ 0.05 或 0.01 反之亦然。

 

 

d)        判断结果

 

 

若 P ＞ 0.05 ，接受原假设，表示给药前后冠脉流量无显著差别。

 

 

若 P ＜ 0.05 或 0.01 拒绝原假设，表示给药前后冠脉流量有显著差别

 

 

VI.      注意事项

 

 

a)        任洛氏液必须新鲜配制

 

 

b)        制备离体心脏标本时不要伤及窦房结，操作要迅速，剪尖朝上。

 

 

c)        主动脉套管必须排气泡，防止心脏血管被空气栓塞。

 

 

d)        主动脉应留长度 0.5-1cm ，插管不宜过深，以防堵住冠脉开口。

 

 

e)        操作时间不宜过长，注意营养液保持新鲜，挤出残血后需更换营养液，整个操作不能超过 20min.