药物对离体豚鼠冠脉流量的影响
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药物对离体豚鼠冠脉流量的影响
I. 目的
a) 掌握离体心脏灌流实验的方法
b) 观察药物对离体豚鼠心脏冠脉流量的影响
c) 学习自身对照 t 检验的统计方法
II. 原理
i. 离体心脏实验最常用的方法：
a) 八木氏法
b) Straub 法
c) Langendorff 法
前两种方法适用于观察药物对两牺类动物青蛙、蟾蜍、等离体心脏，主要观察药物直接对心脏收缩力、传导与心输出量的影响。 Langendorff 法适用于研究药物对哺乳类动物兔、豚鼠、大白鼠和猫等离体心脏的影响，观察药物对心肌的直接作用，还可以观察药物对冠脉流量的影响。
ii. 离体实验条件：供氧、供能、恒温、恒压
iii. 冠脉循环的解剖特点：心肌的血液供应来自左右冠状动脉。冠状动脉的两个开口在主动脉根部动脉瓣上方，分别叫做左前窦、右后窦。左右冠状动脉及其分支的走向可有多种变异。左冠状动脉主要供应左心室的前部，右冠状动脉主要供应左心室的后部和右心室。左冠状动脉的血液流经毛细血管和静脉后，主要经由冠脉窦回流入右心房，而右冠状动脉的血液则主要经较细的心前静脉直接回流入右心房。另外还有一小部分冠脉血液可通过心最小静脉直接流入左、右心房和心室腔内。
iv. 灌流方法：采用逆血流方向灌注营养液，主动脉瓣关闭，营养液经冠状动脉开口进入心脏冠脉循环，再经由左右心房、心室从上下腔静脉、肺静脉等断口处流出。
v. 与冠脉流量相关因素： ， Q 为冠脉流量， P 为灌注压， R 为冠脉阻力 , 为粘滞系数， 为血管长度， r 为血管半径。若 P 恒定， 不变，则 Q 与 r 成正比。
III. 材料：
i. 动物：豚鼠；标本：心脏
ii. 器材：恒温装置、供氧系统、恒压装置、主动脉套管、手术器械
iii. 药品：复方丹参注射液
垂体后叶素 0.1ug/ml
异丙肾 10ug/ml
IV. 方法：
i. 调节仪器：温度 37 ± 0. 5℃，氧气2-3个/s，压力40-60cm水柱
ii. 制备标本：
a) 击昏豚鼠，剪胸部腹皮，自剑突处剪开胸骨，迅速打开胸腔，暴露心脏，，左手轻轻拿住心脏，剪断上下腔静脉、肺动脉、主动脉及心脏周围的组织，摘出心脏。
b) 用手指轻轻挤压心脏，使心室内残血排出
c) 去除心包膜，找到主动脉。
d) 修剪连接在心脏上的肺叶、气管等累赘物
e) 将主动脉挂在主动脉套管上，供给离体条件。
iii. 稳定标本
连续测定每分冠脉流量，连续三次测定结果相差不大于 0.5ml 为稳定。一般需 5-10min.
iv. 给药：从侧枝沿营养液流向注射药物，快速推注，测定连续 10min 的每分冠脉流量，取极值计算。
a) 复方丹参注射液 0.2ml
b) 垂体后叶素 0.1ml
c) 异丙肾 0.1ml
V. 结果处理
1. 流量增减百分率＝
2. 汇集全班数据进行自身对照 t 检验
配对设计主要有以下情形：
a) 两同质受试对象分别接受两种不同的处理
b) 同一受试对象分别接受两种不同处理
c) 同一受试对象（一种）处理前后
检验步骤：
a) 无效假设：假设给药前后冠脉流量无变化
b) 计算 t 值
c) 确定 P 值
自由度 n ＝ n-1
查附录１的表１查 t( n )0.05 ,t( n )0.01
若 t ＞ t( n )0.05 或 t( n )0.01 ， P ＜ 0.05 或 0.01 反之亦然。
d) 判断结果
若 P ＞ 0.05 ，接受原假设，表示给药前后冠脉流量无显著差别。
若 P ＜ 0.05 或 0.01 拒绝原假设，表示给药前后冠脉流量有显著差别
VI. 注意事项
a) 任洛氏液必须新鲜配制
b) 制备离体心脏标本时不要伤及窦房结，操作要迅速，剪尖朝上。
c) 主动脉套管必须排气泡，防止心脏血管被空气栓塞。
d) 主动脉应留长度 0.5-1cm ，插管不宜过深，以防堵住冠脉开口。
e) 操作时间不宜过长，注意营养液保持新鲜，挤出残血后需更换营养液，整个操作不能超过 20min.
